De Onderzoekers in de Stad van New York en Guangzhou, China pasten de snel-zichontwikkelt koolhydraat microarray technologie toe om een vaccin buiten werking gesteld van SARS-Coronavirus (SARS-CoV) te bestuderen en ontdekten autoimmunogenic activiteit van deze onlangs geïdentificeerde menselijke virale ziekteverwekker.
Gebruikend glycan microarrays, kenmerkten de onderzoekers de koolhydraat bindende activiteit van neutraliserende die antilichamen SARS-CoV door een buiten werking gesteld SARS viraal vaccin wordt onthuld en vonden:
- Een ongewenste autoantibody reactiviteit is aanwezig in SARS-CoV neutralisatieantilichamen
- de auto-immune reactiviteit wordt geleid naar het complexe koolhydraat van een overvloedige menselijke serumglycoproteïne, ASOR (asialo-orosomucoid)
- lectin pha-l wordt geïdentificeerd als specifieke immunologische sonde om dit complexe koolhydraat te ontdekken
- dit lectin bevlekt intensief specifiek de SARS-CoV-Besmette cellen en.
De auteurs zeiden dat gebaseerd op deze bevindingen zij „voldoende immunologisch bewijsmateriaal hebben dat een viraal-uitgedrukte koolhydraatstructuur van de inductie van de auto-immuniteit anti-ASOR in ingeënte dieren de oorzaak is. Deze observaties heffen zorgen op menselijk gebruik van het geheel op virus-gebaseerde SARS vaccin op dat door de cel van aapVero E6.“ wordt geproduceerd
Zij zijn van mening dat het te gewaagd is om een geheel-viraal SARS vaccin aan menselijke onderwerpen te introduceren aangezien zijn immunologisch bezit grotendeels niet gekenmerkt blijft. Zij zeiden: „Het is noodzakelijk om de ongewenste autoimmunogenic activiteit van deze voorbereiding van buiten werking gestelde SARS-CoV te elimineren. Het is mogelijk om een alternatieve cellenvariëteit te identificeren of de E6 cellenvariëteit genetisch te wijzigen Vero door zijn glycosylationweg te veranderen, daardoor producerend vaccins met verbeterde doeltreffendheid zonder autoimmunogenic activiteit.“
Wang en Lu merken op dat de experimentele die benaderingen in hun onderzoek worden ontwikkeld waarschijnlijk toepasselijk voor de immunologische karakterisering van andere virale ziekteverwekkers zijn.
Onderzoek bij de Universiteit van Colombia en de Universiteit die van Sun Yat-sen wordt gedaan
De gelijkwaardige auteurs van het document de „series van Glycan leiden tot de ontdekking van autoimmunogenic activiteiten van SARS-CoV“ zijn Denong Wang, die van de functionele genomicaafdeling van Centrum van het Genoom van Colombia het Universitaire, Universiteit van Artsen & Chirurgen, New York, New York hoofd was; en Jiahai Lu, Verwante Professor op de School van Volksgezondheid bij de Universiteit van Sun Yat-sen, Guangzhou, China.
Lu is ook verantwoordelijk voor het SARS-CoV vaccinprogramma voor de Provincie van Guangdong.
Wang verplaatste onlangs zijn koolhydraat microarray laboratorium naar de Afdelingen van Genetica, Neurologie en Neurologische Wetenschappen, de Universitaire School van Stanford van Geneeskunde, Palo Alto, Californië.
Het onderzoek werd eerst gepubliceerd online in de Artikelen van de Amerikaanse Fysiologische Maatschappij in Pers 25 Mei en verschijnt in de kwestie van Juli 2004 van Fysiologische Genomica, één van 14 dagboeken die bijna 4.000 artikelen bevatten jaarlijks, gepubliceerd door APS.
Experimenten en resultaten
In 2002, ontwikkelde het laboratorium van Wang een praktisch bioarray platform, dat nitrocellulose-met een laag bedekte glasplaatjes als substraat gebruikt om koolhydraatantigenen te immobiliseren. Deze procedure is geschikt voor hoog-productiebouw van koolhydraatseries die bestaande microarray het bevlekken apparaten met behulp van. Zijn groep rapporteerde dat een waaier van macromoleculen met koolhydraten van verschillende structurele configuraties, met inbegrip van polysacchariden, natuurlijke glycoconjugates, en mono en oligosaccharides gekoppeld aan carrier molecules, voor dit bioarray platform toepasselijk is.
Gebruikend deze technologie, construeerde de Groep van Wang een glycan serie om een inzameling van koolhydraatantigenen, met inbegrip van microbiële en installatie-afgeleide polysacchariden te tonen, evenals cellulaire glycan complexe koolhydraten. Om het repertoire van diverse koolhydraatstructuren op een serie uit te breiden, omvatten zij vooral bloedgroepsubstanties A, B, O, Lewis, I, en Iantigenen, hun voorlopers en structurele derivaten die door recent Colombia Professor Elvin A. Kabat en anderen werden bevorderd.
Wang en Lu geloofden dat aftasten het antilichaam van geïmmuniseerde of besmette onderwerpen gebruikend een breed-waaier „vingerafdrukken neemt van“ de glycan serie een specifieke immunologische benadering is van het onderzoeken van het bewijsmateriaal van virale uitdrukking van overeenkomstige complexe koolhydraten. Met deze nieuwe experimentele strategie, kenmerkten zij SARS-CoV neutralisatieantilichamen en ontdekten significante niveaus van antilichamen IgG aan een menselijke serumglycoproteïne ASOR in paard anti-SARS-CoV antilichamen. Nochtans, was er geen opspoorbare antilichamenreactiviteit aan agalacto-orosomucoid (AGOR), een derivaat van ASOR, dat alleen van ASOR door de afwezigheid van het eindresidu van de galactosylsuiker verschilt.
Daarom waren de onderzoekers van mening dat de anti-ASOR antilichamenreactiviteit waarschijnlijk specifiek voor de suikerdelen van ASOR is, en dat de eindgalactose (Gal) beduidend tot de koolhydraat bindende reactiviteit bijdraagt. Deze „spaander-klappen“ leidden de manier tot snelle identificatie van specifieke immunologische sondes die later werden toegepast om te bepalen of de SARS-CoV-Besmette aapcellen antigenic structuren uitdrukt die de complexe koolhydraten op menselijke glycoproteïne nabootsen.
Vraag over auto-immune reacties in SARS pathogenese
De Uitdrukking van ASOR-Gelijkaardige complexe koolhydraten door coronaviruses is eerder niet erkend. ASOR is een overvloedige menselijke serumglycoproteïne en worden de ASOR-Type complexe koolhydraten ook uitgedrukt door andere gastheerglycoproteïnen. Aldus is het menselijke immuunsysteem over het algemeen niet-reagerend aan deze „zelf“ koolhydraatstructuren. Nochtans, wanneer de gelijkaardige suikerdelen door een virale glycoproteïne worden uitgedrukt, kon hun clusterconfiguratie beduidend van die verschillen getoond door cellulaire glycan, daardoor producerend een nieuwe „niet zelf“ antigenic structuur.