I Ricercatori in New York e Canton, Cina hanno applicato la tecnologia rapido-sviluppantesi di microarray del carboidrato per studiare un vaccino inattivato SAR-coronavirus (SAR-CoV) ed hanno scoperto l'attività autoimmunogenic di questo agente patogeno virale umano recentemente identificato.
Facendo Uso dei microarrays glycan, i ricercatori hanno caratterizzato l'attività obbligatoria del carboidrato di SAR-CoV che neutralizzano gli anticorpi suscitata da un vaccino virale inattivato di SAR ed hanno trovato:
- Una reattività indesiderata degli autoanticorpo è presente in anticorpi di neutralizzazione SAR-CoV
- la reattività autoimmune è orientata verso il carboidrato complesso di una glicoproteina umana abbondante del siero, ASOR (asialo-orosomucoid)
- il lectin PHA-L è identificato come una sonda immunologica specifica per individuare questo carboidrato complesso
- questo lectin macchia specificamente ed intensivamente le celle SAR-CoV-infettate.
Gli autori hanno detto quello basato su questi risultati che “hanno prova immunologica sufficiente che una struttura virale-espressa del carboidrato è responsabile dell'induzione dell'autoimmunità anti--ASOR in animali vaccinati. Queste osservazioni suscitano inquietudini su uso umano al del vaccino basato a virus di tutto SAR che è prodotto dalla cella di Vero E6 della scimmia.„
Considerano che sia troppo rischioso presentare un vaccino intero-virale di SAR ai soggetti umani poiché i sui beni immunologici rimangono in gran parte atipici. Hanno detto: “È necessario da eliminare l'attività autoimmunogenic indesiderata di questo preparato di SAR-CoV inattivati. È possibile identificare una linea cellulare alternativa o geneticamente modificare la linea cellulare di Vero E6 alterando la sua via della glicosilazione, quindi producente i vaccini con efficacia migliorata senza attività autoimmunogenic.„
Wang e la LU notano che gli approcci sperimentali sviluppati nella loro ricerca sono probabilmente applicabili per la caratterizzazione immunologica di altri agenti patogeni virali.
Ricerca effettuata alla Columbia University ed all'Università di Sun Yat-sen
Gli autori coeguali del documento “schiere di Glycan piombo alla scoperta delle attività autoimmunogenic di SAR-CoV„ sono Denong Wang, che era direttore della divisione funzionale di genomica del Centro del Genoma di Columbia University, dell'Istituto Universitario dei Medici & dei Chirurghi, New York, New York; e Jiahai LU, Professore Associato al Banco della Salute pubblica all'Università di Sun Yat-sen, Canton, Cina.
La LU egualmente è incaricata del programma vaccino SAR-CoV per la Provincia del Guangdong.
Wang recentemente ha mosso il suo laboratorio di microarray del carboidrato verso i Dipartimenti della Genetica, della Neurologia e delle Scienze Neurologiche, Scuola di Medicina di Stanford University, Palo Alto, la California.
La ricerca in primo luogo è stata pubblicata online negli Articoli della Società Fisiologica Americana in stampa Il 25 maggio e compare nell'emissione Del luglio 2004 di Genomica Fisiologica, una di 14 pubblicazioni che contengono annualmente quasi 4.000 articoli, pubblicata dai APS.
Esperimenti e risultati
Nel 2002, il laboratorio di Wang ha sviluppato una piattaforma bioarray pratica, che utilizza le lastre di vetro nitrocellulosa-rivestite come substrato per vincolare gli antigeni del carboidrato. Questa procedura è adatta a costruzione di alto-capacità di lavorazione delle schiere del carboidrato facendo uso delle unità attuali di macchia di microarray. Il Suo gruppo ha riferito che un intervallo delle macromolecole contenenti carboidrati delle configurazioni strutturali distinte, compreso i polisaccaridi, glycoconjugates naturali ed il mono e gli oligosaccaridi si è accoppiato alle molecole dei portafili, è applicabile per questa piattaforma bioarray.
Facendo Uso di questa tecnologia, il gruppo di Wang ha costruito una schiera glycan per video una collezione di antigeni del carboidrato, compreso i polisaccaridi microbici e impianto-derivati come pure i carboidrati complessi glycan cellulari. Per estendere il repertorio di diverse strutture del carboidrato su una schiera, hanno incluso particolarmente le sostanze A, B, O, Lewis, I ed antigeni dei, i loro precursori e derivati strutturali del gruppo sanguigno che sono stati promossi dal Professor recente Elvin A. Kabat ed altri di Colombia.
Wang e la LU hanno ritenuto che scandendo l'anticorpo “prendesse le impronte digitali a„ dell'immunizzato di o gli individui infettati che usando una schiera glycan dell'vasto-intervallo è un approccio immunologico specifico ad esplorare la prova dell'espressione virale dei carboidrati complessi corrispondenti. Con questa strategia sperimentale novella, hanno caratterizzato gli anticorpi di neutralizzazione SAR-CoV ed hanno individuato i livelli significativi di anticorpi di IgG ad una glicoproteina umana ASOR del siero in anticorpi del cavallo anti-SAR-CoV. Tuttavia, non c'era la reattività rilevabile a agalacto-orosomucoid, (AGOR) un derivato dell'anticorpo di ASOR, che differisce solamente da ASOR dall'assenza del residuo terminale dello zucchero di galactosyl.
Di Conseguenza, i ricercatori hanno considerato che la reattività anti--ASOR dell'anticorpo fosse probabilmente specifica per le parti dello zucchero di ASOR e che il galattosio terminale (Gallone) contribuisce significativamente alla reattività obbligatoria del carboidrato. Questi “chip-colpi„ piombo il modo all'identificazione rapida delle sonde immunologiche specifiche che successivamente si sono applicate per determinare se le celle SAR-CoV-infettate della scimmia esprime le strutture antigeniche che imitano i carboidrati complessi sulla glicoproteina umana.
Domanda circa le risposte autoimmuni in patogenesi di SAR
L'Espressione dei carboidrati complessi del tipo di ASOR dai coronaviruses è precedentemente non riconosciuta. ASOR è una glicoproteina umana abbondante del siero ed i carboidrati complessi ASOR tipi egualmente sono espressi da altre glicoproteine ospite. Così il sistema immunitario umano è generalmente non rispondente a queste strutture del carboidrato “di auto„. Tuttavia, quando le simili parti dello zucchero sono espresse da una glicoproteina virale, la loro configurazione del cluster potrebbe differire significativamente da quelle video da un glycan cellulare, quindi generando una struttura antigenica novella “di non auto„.