Forskare i New York City och Guangzhou, Kina applicerade denframkallande kolhydratmicroarrayteknologin till studien ett inactivated (SARS-CoV) vaccin SARS-coronavirus och upptäckte autoimmunogenic aktivitet av denna nyligen identifierade virus- pathogen för människan.
Genom Att Använda glycan microarrays, karakteriserade grundar forskarna den bindande aktiviteten för kolhydratet av SARSsom neutraliserar antikroppar elicited av ett inactivated virus- vaccin för SARS och:
- En undesired autoantibodyreactivity är närvarande i antikroppar för neutralization SARS-CoV
- den autoimmune reactivityen riktas in mot det komplexa kolhydratet av en överflödande människaserumglycoprotein, ASOR (asialo-orosomucoid)
- lectinen PHA-L identifieras som en specifik immunologic sond för att avkänna detta komplexa kolhydrat
- denna lectin befläcker desmittade cellerna specifikt och intensivt.
Författarna sade att det som baseras på dessa rön de ”har tillräckligt immunologic att bevisa att ettuttryckt kolhydrat strukturerar är ansvariga för induktionen av den anti-ASOR autoimmunityen i vaccinerade djur. Dessa observationslönelyftbekymmer på människabruk av det helhet virus-baserade SARS-vaccinet som produceras av den apaVero E6 cellen.”,
De betraktar att det är för riskabelt att introducera ettvirus- SARS-vaccin till människan betvingar, sedan dess immunological egenskap återstår i hög grad uncharacterized. De sade: ”Är Det nödvändigt att avlägsna den undesired autoimmunogenic aktiviteten av denna förberedelse av inactivated SARS-CoV. Det är möjligheten som identifierar en alternativ cell, fodrar, eller genetiskt att ändra den Vero E6 cellen fodra, genom att förändra dess glycosylationbana som producerar därmed vaccin med förhöjd effektivitet utan autoimmunogenic aktivitet.”,
Wang och Lu noterar att det experimentellt att närma sig framkallat i deras forskning är troligen tillämpbart för den immunologic karakteriseringen av andra virus- pathogens.
Forska gjort på den Columbia Universitetar och den Sun Yat-sen Universitetar
Co-jämliket författarna av de pappers- ”Glycan samlingarna som är bly- till upptäckten av autoimmunogenic aktiviteter av SARS-CoV”, är Denong Wang, som var huvudet av den funktionella genomicsuppdelningen av den Columbia UniversitetarGenom Centrerar, Högskolan av Läkare & Kirurgar, New York, New York; och Jiahai Lu, Förbunden Professor på Skola av Allmän hälsa på den Sun Yat-sen Universitetar, Guangzhou, Kina.
Lu är också i laddningen av det vaccineraa programet SARS-CoV för det Guangdong Landskapet.
Wang som för en tid sedan är rörd hans kolhydratmicroarraylaboratorium till Avdelningarna av Genetik, Neurology och Neurological Vetenskaper, Stanford-Universitet Skolar av Medicinen, Palo Alto, Kalifornien.
Forskningen publicerades först direktanslutet i Fysiologiska Samhälle för Amerikanen Artiklar i PressMaj 25 och syns i Juli 2004 utfärdar av Fysiologisk Genomics, en av 14 förar journal över innehålla nästan 4.000 artiklar årligen, publicerat av APS.
Experiment och resultat
I 2002 Wangs framkallade laboratorium en praktisk bioarray plattform, som använder nitrocellulose-täckte glass glidbanor som substraten för att immobilize kolhydratantigens. Detta tillvägagångssätt är passande för kick-genomgång konstruktion av kolhydratsamlingar genom att använda den existerande microarrayen som spotting apparater. Hans grupp anmälde att en spänna av kolhydrat-innehållande macromolecules av distinkt strukturella konfigurationer, inklusive polysaccharides, naturliga glycoconjugates, och det mono och oligosaccharidesna som kopplas ihop till bäraremolekylar, är tillämpbar för denna bioarray plattform.
Genom Att Använda denna teknologi, Wangs konstruerade grupp en glycan samling för att visa en samling av kolhydratantigens, inklusive mikrobiella och växt-härledde polysaccharides såväl som cell- glycan komplexa kolhydrat. Att fördjupa repertoaren av det olika kolhydratet strukturerar på en samling, dem speciellt inklusive blodgruppvikter A, B, Nollan, Lewis, I, och I-antigens, deras precursors och strukturella derivata som vårdades av den sena Columbia Professorn Elvin A. Kabat och andra.
Wang och Lu trodde att avläsa antikroppen ”identifierar med fingeravtryck” av immunized eller smittat betvingar genom att använda enspänna som glycan samling är ett specifikt immunologic att närma sig till undersökning av bevisa av det virus- uttryckt av motsvarande komplexa kolhydrat. Med denna nya experimentella strategi karakteriserade de antikroppar för neutralization SARS-CoV, och avkänt viktigt jämnar av IgG antikroppar till en människaserumglycoprotein ASOR i hästanti-SARS-CoV antikroppar. Emellertid fanns det någon antikroppreactivity som kan spåras till agalacto-orosomucoid (AGOR), en derivata av ASOR, som skilja sig åt från ASOR endast vid frånvaroen av de slutliga galactosylsockerrestna.
Därför de ansedda forskarna som den anti-ASOR antikroppreactivityen är den rimliga närmare detalj för sockerhälfterna av ASOR, och som den slutliga galactosen (Gal.) bidrar markant till kolhydratbandreactivityen. Dessa ”gå i flisor-hits” ledde långt till forID av specifika immunologic sonder som applicerades därpå för att bestämma den huruvida SARS-CoV-smittade apan som, celler uttrycker antigenic strukturerar, som efterapar de komplexa kolhydraten på människaglycoproteinen.
Ifrågasätta om autoimmune svar i SARS-pathogenesis
Uttryckt av ASOR-något liknande komplexa kolhydrat vid coronaviruses är föregående oigenkännligt. ASOR är en överflödande människaserumglycoprotein, och ASOR-typ de komplexa kolhydraten uttrycks också av annat varar värd glycoproteins. Således är människaimmunförsvaret allmänt non-svars- till dessa ”det själv” kolhydratet strukturerar. Emellertid när liknande sockerhälfter uttrycks av en virus- glycoprotein, deras samla i en klunga konfigurationen kunde skilja sig åt markant från de som visas av ett cell- glycan och därmed att frambringa en antigenic ny ”non-själv”, strukturerar.