Une avancée technique dans les techniques de laboratoire peuvent fournir aux chercheurs un accès plus large à la biologie de l'interférence ARN, un processus de bloquer l'activité des gènes ciblés. ARN interférence a récemment émergé comme un outil important pour étudier comment les gènes fonctionnent dans les processus biologiques normaux et dans la maladie.
Écrivant dans le Journal des méthodes immunologiques, publié en ligne le 24 Mars une équipe de recherche de L'Hôpital pour enfants de Philadelphie technologies de laboratoire combinées en utilisant l'interférence ARN pour manipuler des cellules T humaines. Les lymphocytes T sont des cellules immunitaires qui circulent dans le sang, avec des rôles importants dans les maladies auto-immunes, les maladies infectieuses et certains cancers.
"Les cellules T ont déjà été difficile à modifier avec l'ARN interférant, étant plus mobiles que les autres types de cellules qui normalement restent stationnaires dans les cultures cellulaires", a déclaré chef de l'étude Terri H. Finkel, MD, Ph.D., chef de rhumatologie à l'enfance Hospital de Philadelphie. «Notre approche permet d'atteindre des résultats comparables à la technique classique, qui utilise des petits ARN interférents de synthèse, mais est très coûteux et rares. Nous nous attendons à notre technique pour élargir la boîte à outils pour les scientifiques font des recherches en immunologie."
L'interférence ARN (ARNi), qui se produit naturellement dans les cellules, est un processus dans lequel brève séquences d'ARN, appelé ARN signaux petit bloc interférents (siRNA) à partir d'un gène particulier. Ce processus, appelé silençage génique, inhibe le gène de s'acquitter de sa fonction de création d'une protéine ou un autre produit du gène. Le corps utilise souvent l'ARNi en tant que défense contre l'action des virus hostiles.
Au cours des dernières années, les chercheurs biomédicaux ont étudié la façon dont ils pourraient éventuellement exploiter l'ARNi dans de nouveaux médicaments. Un autre axe de recherche utilise l'ARNi en tant qu'outil de recherche, d'enquêter sur les fonctions des gènes spécifiques, en étudiant ce qui arrive lorsque l'ARNi temporairement les silences - un processus appelant "abattre" le gène.
Les recherches menées par l'équipe du Dr Finkel vise à étendre l'ARNi à une plus large bassin de chercheurs en faisant la technique moins coûteuse et plus largement disponibles, ainsi que son adaptation aux cellules T, un type de cellule précédemment réfractaires à une telle manipulation. Leur technique combine trois technologies déjà accessibles aux chercheurs du laboratoire: nucléofection, des cassettes d'expression de siRNA et des vecteurs d'expression de siRNA. La technologie nucléofection utilise des solutions spécialisées et des impulsions électriques pour ouvrir temporairement un noyau cellulaire. Dans le noyau, les chercheurs d'insérer une charge utile de l'ADN.
L'ADN contient une séquence de code génétique qui produit un siRNA spécifique après son entrée dans un noyau. Les chercheurs ont enfermé l'ADN contenu dans une cassette d'expression de siRNA (SEC), un peu coûteux, produit rapidement synthétisé qui transporte des séquences génétiques de réglementer l'activité des gènes que l'on obtient une siARN. Après les chercheurs ont testé une variété de secondes pour déterminer lequel est le plus efficace, ils ont inséré le désiré SEC dans un vecteur, un agent biologique qui s'insère dans le noyau d'une cellule cible plus efficacement que d'une cassette non accompagnés.
Les chercheurs ont d'abord testé leur approche en introduisant un gène de la protéine fluorescente verte dans les cellules T humaines, et en utilisant siRNA pour inhiber l'expression de ce gène, et dim de sa lueur fluorescente.