Sebuah kemajuan teknis di bidang teknik laboratorium dapat memberikan peneliti biologi akses yang lebih luas terhadap interferensi RNA, proses memblokir aktivitas gen yang ditargetkan. Interferensi RNA baru-baru ini muncul sebagai alat penting dalam mempelajari bagaimana gen berfungsi dalam proses biologi normal dan pada penyakit.
Menulis dalam Journal of Metode imunologi, diterbitkan online pada 24 Maret, sebuah tim peneliti dari Rumah Sakit Anak Philadelphia teknologi laboratorium dikombinasikan dalam menggunakan interferensi RNA untuk memanipulasi sel T manusia. Sel T adalah sel imun yang beredar dalam darah, dengan peran penting dalam penyakit autoimun, penyakit menular dan beberapa jenis kanker.
"Sel T sebelumnya telah sulit untuk memodifikasi dengan RNA campur, yang lebih mobile daripada jenis sel lain yang biasanya tetap diam dalam kultur sel," kata pemimpin studi Terri H. Finkel, MD, Ph.D., kepala Rheumatology di The Anak Rumah Sakit Philadelphia. "Pendekatan kami mencapai hasil yang sebanding dengan teknik konvensional, yang menggunakan RNA sintetis campur kecil tapi sangat mahal dan dalam pasokan pendek Kami berharap. Teknik kami untuk memperluas toolbox bagi para ilmuwan melakukan penelitian dalam imunologi."
Interferensi RNA (RNAi), yang secara alami terjadi dalam sel, adalah sebuah proses di mana RNA urutan singkat, disebut sinyal blok kecil mengganggu RNA (siRNA) dari gen tertentu. Proses ini, disebut membungkam gen, menghambat gen dari melaksanakan fungsinya untuk menciptakan suatu protein atau gen produk lain. Tubuh sering menggunakan RNAi sebagai pertahanan terhadap aksi virus bermusuhan.
Selama beberapa tahun terakhir, para peneliti biomedis telah menyelidiki bagaimana mereka akhirnya bisa memanfaatkan RNAi dalam obat-obatan baru. Baris lain penelitian menggunakan RNAi sebagai alat penelitian, menyelidiki fungsi gen spesifik dengan mempelajari apa yang terjadi ketika RNAi sementara keheningan mereka - sebuah proses memanggil "merobohkan" gen.
Penelitian oleh tim Dr Finkel bertujuan untuk memperpanjang RNAi untuk kolam yang lebih luas peneliti dengan membuat teknik lebih murah dan lebih banyak tersedia, serta beradaptasi ke sel T, sejenis sel yang sebelumnya keras untuk manipulasi tersebut. Teknik mereka menggabungkan tiga teknologi yang sudah diakses oleh peneliti laboratorium: nucleofection, kaset ekspresi siRNA, dan vektor ekspresi siRNA. Nucleofection menggunakan solusi teknologi khusus dan pulsa listrik untuk sementara membuka inti sel. Ke dalam inti, peneliti memasukkan muatan DNA.
DNA memegang urutan kode genetik yang menghasilkan siRNA spesifik setelah memasuki inti. Para peneliti DNA terbungkus dalam sebuah kaset ekspresi siRNA (SEC), sebuah produk, murah cepat disintesis yang membawa urutan genetik untuk mengatur aktivitas gen yang menghasilkan suatu siRNA. Setelah peneliti menguji berbagai SECS untuk menentukan yang paling efektif, mereka dimasukkan SEC yang diinginkan ke dalam vektor, agen biologis yang memasukkan dirinya ke dalam inti sel target lebih efisien daripada kaset tanpa ditemani.
Para peneliti pertama diuji pendekatan mereka dengan memperkenalkan gen untuk protein fluorescent hijau ke dalam sel T manusia, dan menggunakan siRNA untuk menghambat ekspresi yang gen, dan redup cahaya neon.