Methoden voor het markeren van moleculen gene wijzigingen en metabole verschuivingen te identificeren

Fysieke veranderingen van DNA in chromosomen kunnen leiden tot ernstige ziekten zoals Down syndroom, Prader-Willi syndroom of kanker.

Ook kunnen veranderingen in de fysiologische omgeving van cellen, met drugs of toxines, bijvoorbeeld, veranderen hun metabole output. Voor het bijhouden van deze processen, moeten wetenschappers manieren om te markeren van genen en hun eiwitproducten. Van deze maand release van Cold Spring Harbor protocollen (www.cshprotocols.org) heeft vrij beschikbare methoden voor het markeren van moleculen gene wijzigingen en metabole verschuivingen te identificeren.

De eerste methode (http://www.cshprotocols.org/cgi/content/full/2007/10/pdb.prot4743) beschrijft hoe cellen van bacteriën, gist, insecten of zoogdieren in medium met de stabiele isotoop stikstof-15 groeien. Als de cellen groeien, ze produceren ontluikende eiwitten die stikstof-15 omvatten, een markering die nieuw onderscheidt gevormd stofwisselingsproducten van bestaande. De verschillen tussen deze cellen en "normale" cellen (gegroeid in media zonder stikstof-15) kunnen vervolgens met behulp van een techniek genaamd massaspectrometrie worden gekwantificeerd.

Wetenschappers moeten te identificeren structurele kenmerken en afwijkingen in chromosomen, tag die DNA-sondes met visuele markeringen. De tweede vrij beschikbare methode (http://www.cshprotocols.org/cgi/content/full/2007/10/pdb.prot4730) beschrijft hoe om DNA-sondes label met fluorescerende markers van zes verschillende kleuren, die het zichtbare spectrum beslaan. Deze gelabelde DNA-sondes kunnen tegelijkertijd gebruikt worden in vis (Fluorescente kruising in situ) experimenten, gedurende welke de sondes aan specifieke chromosomale regio's van belang binden. De kleurrijke chromosomen kunnen vervolgens worden weergegeven onder een microscoop.

http://www.cshl.org