Methoden für die Markierung von Molekülen, um Genänderungen und metabolische Schichten zu kennzeichnen

Körperliche Änderungen von DNS in den Chromosomen können ernste Krankheiten wie Down-Syndrom, Prader-Willi-Syndrom oder Krebs verursachen.

Ebenso können Änderungen an der physiologischen Umgebung von Zellen, mit Drogen oder Giftstoffen zum Beispiel ihre metabolische Ausgabe ändern. Um diese Prozesse aufzuspüren, benötigen Wissenschaftler Methoden Gene und ihre Proteinprodukte zu markieren. Die Freigabe Dieses Monats von Kalten Feder-Hafen-Protokollen (www.cshprotocols.org) kennzeichnet frei erhältliche Methoden für die Markierung von Molekülen, um Genänderungen und metabolische Schichten zu kennzeichnen.

Die erste Methode (http://www.cshprotocols.org/cgi/content/full/2007/10/pdb.prot4743) beschreibt, wie man Zellen von den Bakterien, von der Hefe, von den Insekten oder von den Säugetieren in den Media wächst, die das stabile Isotop nitrogen-15 enthalten. Während die Zellen wachsen, produzieren sie werdende Proteine, die nitrogen-15 enthalten, eine Markierung, die neugeformte Stoffwechselprodukte von den bereits bestehenden unterscheidet. Die Unterschiede zwischen diesen Zellen und „normalen“ Zellen (gewachsen in den Media ohne nitrogen-15) können unter Verwendung einer Technik dann mengenmäßig bestimmt werden, die Massenspektrometrie genannt wird.

Um strukturelle Merkmale und Abweichungen in den Chromosomen zu kennzeichnen, müssen Wissenschaftler DNS-Fühler mit Sichtmarkierungen mit Warnschild versehen. Die zweite frei erhältliche Methode (http://www.cshprotocols.org/cgi/content/full/2007/10/pdb.prot4730) beschreibt, wie man DNS-Fühler mit Leuchtstoffmarkierungen von sechs verschiedenen Farben beschriftet, die das sichtbare Spektrum überspannen. Diese beschrifteten DNS-Fühler können in den Experimenten der FISCHE (Leuchtstoff in-situhybridation) gleichzeitig verwendet werden, während deren die Fühler an spezifische chromosomale Regionen von Zinsen binden. Die bunten Chromosomen können unter einem Mikroskop dann angesehen werden.

http://www.cshl.org