Metodi per la tracciatura delle molecole per identificare le alterazioni del gene e gli spostamenti metabolici

Le alterazioni Fisiche di DNA in cromosomi possono causare le malattie serie quali Sindrome di Down, la Sindrome di Prader-Willi, o il cancro.

Inoltre, i cambiamenti all'ambiente fisiologico delle celle, con le droghe o le tossine, per esempio, possono alterare il loro output metabolico. Per tenere la carreggiata questi trattamenti, gli scienziati hanno bisogno dei modi tracciare i geni ed i loro prodotti della proteina. La versione di Questo mese dei Protocolli Freddi del Porto della Sorgente (www.cshprotocols.org) caratterizza liberamente i metodi disponibili per la tracciatura delle molecole per identificare le alterazioni del gene e gli spostamenti metabolici.

Il primo metodo (http://www.cshprotocols.org/cgi/content/full/2007/10/pdb.prot4743) descrive come coltivare le celle dai batteri, dal lievito, dagli insetti, o dai mammiferi nei media che contengono l'isotopo stabile nitrogen-15. Mentre le celle si sviluppano, producono le proteine nascenti che includono nitrogen-15, un indicatore che distingue i prodotti metabolici formati di recente da quei preesistenti. Le differenze fra queste celle e le celle “normali„ (sviluppate nei media senza nitrogen-15) possono poi essere quantificate facendo uso di una tecnica chiamata spettrometria di massa.

Per identificare le funzionalità e le anomalie strutturali in cromosomi, gli scienziati devono etichettare le sonde del DNA con gli indicatori visivi. Il secondo liberamente metodo disponibile (http://www.cshprotocols.org/cgi/content/full/2007/10/pdb.prot4730) descrive come contrassegnare le sonde del DNA con gli indicatori fluorescenti di sei colori differenti, che misurano lo spettro visibile. Questi hanno contrassegnato le sonde del DNA possono essere utilizzati simultaneamente negli esperimenti del PESCE (ibridazione in situ fluorescente), durante cui le sonde legano alle regioni cromosomiche specifiche di interesse. I cromosomi variopinti possono poi essere osservati sotto un microscopio.

http://www.cshl.org