Ver as vesículas tintura-embaladas faz com que explodam

É uma pergunta de longa data: Pode apenas o acto de observar uma influência da experiência os resultados, De acordo com um estudo novo por cientistas da Universidade de Rockefeller, se a experiência usa uma tintura fluorescente chamada laranja da acridina, a resposta é ressoar sim.”

As Pilhas usam um processo chamado exocytosis para entregar as vesículas do membrana-limite completas das proteínas, dos neurotransmissor e das outras moléculas a sua membrana exterior e além. Entre outras coisas, estes pacotes químicos pequenos são vitais para uma comunicação da pilha-à-pilha. Os pesquisadores interessados no melhor exocytosis compreensivo têm usado Assim a laranja da acridina para etiquetar as vesículas na tentativa de observar o processo. Porque a tintura obtem prendida nas vesículas múltiplas e aumenta sua fluorescência em cima da liberação das vesículas, o flash característico resultante foi considerado uma indicação da aparência do exocytosis.

Mas a pesquisa publicada nas Continuações da Academia Nacional das Ciências por Sanford Simon, cabeça do Laboratório da Biofísica Celular, e do professor adjunto Jyoti Jaiswal da pesquisa, mostra que o flash alaranjado da acridina característica não é o resultado exclusivo do exocytosis de todo. Em Lugar De, a luz do microscópio igualmente fazia com que as vesículas estourassem em um processo conhecido como o lysis. “Faça Não somente as moléculas de tintura concentram-se nas vesículas mas, em umas concentrações mais altas, conheceu que a luz pode fazer com que a laranja da acridina as lyse,” Jaiswal diz. Apenas olhar as vesículas através de um microscópio tem o potencial interromper as membranas do lipido.

Ao fazer uma experiência em 1992, Simon usou a laranja da acridina para estudar o exocytosis e a serra apenas o que esperou. “Por 20 a 30 segundos, Eu era ectático,” diz. “Mas por outro lado Eu realizei que não significou necessariamente que nós olhávamos o exocytosis. Nós possivelmente apenas criávamos o photodamage.” Seu laboratório tem usado desde outros meios estudar o processo.

Então uma série recente de papéis, em que os autores usaram a laranja da acridina para explorar cálcio-provocou o exocytosis nos astrocytes, despertou suspeitas de Simon e de Jaiswal. Os Astrocytes são as pilhas glial pequenas, estrela-dadas forma que são parte da rede do apoio de sistema neural; porque seu papel na fisiologia do cérebro e no regulamento neural somente apenas está começando a ser endereçado, o exocytosis compreensivo nestas pilhas é particularmente importante. Assim os pesquisadores de Rockefeller fizeram suas próprias experiências com laranja da acridina. Encontraram que quando olharam através do microscópio poderiam, certamente, ver os flashes brilhantes da tintura que olharam como se as vesículas estavam fundindo com a membrana de plasma da pilha. Mas quando moveram o campo do microscópio para uma área diferente da pilha, viram uma outra agitação dos fogos-de-artifício, prova que a luz do microscópio alertava as vesículas alaranjado-enchidas acridina lyse.

Isto põe a laranja prévia da acridina, experiências do exocytosis na pergunta, Jaiswal diz. “Usar a laranja da acridina significa que a responsabilidade está na pessoa que faz a experiência para mostrar que o que, com referência à vista é a fusão.” E aquele era precisamente o que e Simon foram sobre fazer. A fim diferenciar-se entre o exocytosis e o lysis imagem-induzido, Simon nota que é importante determinar os resultados. Assim os dois pesquisadores uniram uma combinação de técnicas experimentais e matemáticas que poderiam então ser usadas para discriminar entre as vesículas que lysing daquelas que estão fundindo com a membrana. Fluorescente etiquetando a proteína da membrana da vesícula com um marcador diferente, não disruptivo, e a determinação de como as partículas se dispersaram, podiam distinguir entre os dois processos e encontrar que o exocytosis cálcio-provocado ocorre nos astrocytes, apenas não ao grau que exagerado tinha parecido de utilização a laranja da acridina.

De facto, Jaiswal e Simon podiam mesmo fixar para baixo pelo menos um dos organelles do astrocyte que podem se submeter a este tipo do exocytosis: lisosomas. O Exocytosis destes compartimentos do membrana-limite é sabido já para jogar um papel na imunidade e pilhas feridas da cura, assim que os resultados novos fornecem uma outra avenida para que os pesquisadores levem a cabo. “Há já um corpo da literatura no exocytosis do lisosoma e nos seus papéis, e nós olhamos como regulou,” Jaiswal dizemos. “Agora, tudo que a literatura se tornou relevante à biologia do astrocyte, demasiado.”

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