Naukowowie konstruują małego CRISPR-Cas9 system do teraz

Naukowowie przy centrum dla genom inżynierii wśród instytutu dla Podstawowej nauki we współpracy z KIM Eunji i KIM Jeong hun, konstruowali małego CRISPR-Cas9 do teraz (AAV), dostarczali ja przez kojarzących wirusów i używali ja, mięsień komórki i w oczach myszy modyfikować gen powoduje ślepotę. (IBS) (toolGen Inc.) (Seul obywatela uniwersytet) Publikuje na natur komunikacjach, ten CRISPR-Cas9 system, zapoczątkowywający od Campylobacter jejuni, oczekuje zostać pożytecznie leczniczym narzędziem przeciw błoniu i choroba celom "undruggable". (cjCas9)

CRISPR-Cas9 jest modnym powiedzonkiem wśród cząsteczkowych biolożek. Ja jest nowatorskim, tanim i precyzyjnym techniką redagować geny. Cas9 jest "genów nożyc" proteiną: Ja tworzy cięcia na celu genie w precyzyjnych lokacjach wskazywać przewdonika RNA. W rozkazie dla CRISPR-Cas9 kompleksu dosięgać celu DNA, ja musi dostarczający przez plasmids lub wirusów. AAV jest wektorem, używał szeroko w gen terapii - Vivo i," wyjaśnia KIM jin, dyrektor IBS centrum dla genom inżynierii i korespondować autor nauka. "skutecznym wyrażać gen interes wewnątrz i bezpiecznym" Naturalnie, Cas9 używa kilka bakteriami jako immunitetowa broń; ja potrzebuje ciąć wirusowego DNA który mógł uszkadzać bakterie. Pospolita wersja CRISPR-Cas9 technika używa Cas9 czerpiącego od bakteria paciorkowa - pyogenes. Jakkolwiek, ten proteina zrobi 1.368 aminoacids i ono jest zbyt wielki dostarczającym i pakuje w AAV. Nawet jeśli naukowowie rozszczepiają mnie up w dwa części, each pakujący w różnym wirusie, inni zagadnienia powstaje: Dwoista kwota wirusy potrzebuje dostarczającym i rozłam Cas9 jest mniej aktywnego niż nietknięty spCas9. Gronkowiec - aureus Cas9 także używa dla genu edytorstwa. Ja jest nieznacznie mały ale no opuszcza dosyć przestrzeni dla innych protein. (1.053 aminoacids), tak, że ono może właśnie dostosowywać wśrodku AAV,

W ten nauce drużyna zakłada że cjCas9 jest skuteczny i mały. Ja 984 aminoacids i ono może pakujący w AAV wraz z więcej niż jeden przewdonikiem RNAs as well as z fluorescencyjną reporter proteiną.

Po to, aby używać bakteryjną proteinę dla genu edytorstwa optymalizować niektóre aspekty technika musieli, naukowowie. Projektowali krótką DNA sekwencję natychmiast po DNA sekwencję celującą Cas9, nazwany Protospacer Graniczący motyw (PAM). Each różny Cas9 potrzebuje specyfika PAM sekwencję, inaczej no będzie sprawnie oprawiać i cleave celu DNA sekwencję ja. Po drugie, musieli modyfikować długość przewdonika RNA.

Następnie, IBS naukowowie pakowali nowego CRISPR-Cas9 kompleks w AAV, wraz z dwa RNAs przewdonikiem i fluorescencyjną reporter proteiną, mutować geny w myszy oczach i mięśniach. Koncentrowali na dwa genach wymagających w odnosić sie macular degeneraci, jeden prowadzi przyczyny ślepota w dorosłych. (AMD) Jeden gen jest pospolitym leczniczym celem dla ADM, nazwany Naczyniasty endothelial wzrostowy czynnik A (VEGF A) inny jeden jest transkrybowania czynnikiem który aktywuje transcripction VEGF A i ja zna jako HIF-1a. W przeciwieństwie do VEGF A, HIF-1a no rozważał jako leka cel. So-called'undruggable'genes, tak jak transkrybowanie wskazuje czynniki ogólnie, no może celujący bezpośrednio, niwecznikami i innymi lekami biologicznych lub substanci chemicznej. W ten nauce zespół badaniowy udowadniał teren choroidal neovascularization (CNV) i zmniejszał. że cjCas9 dostarczający siatkówka przez AAV może unieczynniać Hif1a A w myszach i VEGF wydajnie

Intraocular zastrzyki pakujący CRISPR-CjCas9 mogli być korzystni taktować różnorodne siatkówkowe choroby i systemowe choroby. "cjCas9 jest wysoce specyfikiem i no powoduje cel mutacj w genomu," wyjaśnia KIM jin.

Hif1a genu celu sekwencje są to samo w oba myszach i istoty ludzkie, w ten sposób używać w przyszłości dla traktowania ADM w ludzkich pacjentach mogli metoda przedstawiająca w ten nauce. Brukować sposób zastosowanie cjCas9 przeciw genom lub cyfrowanie sekwencjom "undruggable", ten technologia może poszerzać pasmo leczniczy cele, robi całkowitemu ludzkiemu genomowi potencjalnie druggable.

Źródło: http://www.ibs.re.kr/cop/bbs/BBSMSTR_000000000738/selectBoardArticle.do?nttId=14255

Advertisement