Научные Работники проектируют самую малую систему CRISPR-Cas9 для того чтобы датировать

Научные Работники на Центре для Генома Инджиниринга, внутри Институт для Основной Науки (IBS), в сотрудничестве с Гунном КИМ Eunji (ToolGen Inc.) и КИМ Jeong (Университетом Соотечественника Сеул) проектировали самое малое CRISPR-Cas9 для того чтобы датировать, поставляли ему к клеткам мышцы и в глазах мышей через adeno-связанные вирусы (AAV) и использовали ему для того чтобы доработать ген причиняя слепоту. Опубликовано на Связях Природы, ожидано, что будет эта система CRISPR-Cas9, котор возникли от jejuni Campylobacter (CjCas9), полезным терапевтическим инструментом против общего и «undruggable» целей заболеванием.

CRISPR-Cas9 громкое слово среди молекулярных биологов. Новаторское, дешево и точный метод для того чтобы редактировать гены. Cas9 «ген scissors» протеин: Оно создает отрезки на гене цели в точных положениях показанных РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТОЙ направляющего выступа. Для того комплекс CRISPR-Cas9 для достижения ДНА цели, оно должен быть поставлен через плазмиды или вирусы. «AAV эффективный и безопасный вектор для того чтобы выразить ген интереса внутри - vivo и было использовано широко в терапии гена,» объясняет КИМ Jin-Soo, директор Центра IBS для Генома Инджиниринга и соответствуя автор изучения. Естественно, Cas9 использовано несколькими бактерий как оружие невосприимчивости; оно необходим для того чтобы отрезать вирусное ДНА которое смогло повредить бактерии. Самая общяя версия метода CRISPR-Cas9 использует Cas9 выведенное от Стрептококка бактерии - pyogenes. Однако, этот протеин сделан из 1.368 аминокислот и он слишком большой быть поставленным и упакованным в AAV. Даже если научные работники разделили его вверх в 2 части, каждое упаковало в различном вирусе, другие вопросы возникает: Двойной сумме вирусов нужно быть поставленным и разделение Cas9 более менее активно чем неповрежденное SpCas9. Золотистый Стафилококк Cas9 также использован для редактировать гена. Он немножко более мал (1.053 аминокислоты), так, что он сможет как раз приспосабливать внутри AAV, но не выходит достаточный космос для других протеинов.

В этом изучении, команда нашла что CjCas9 и эффективно и мало. Оно имеет 984 аминокислоты и его можно упаковать в AAV вместе с больше чем одним направляющим выступом RNAs так же, как с дневным протеином репортера.

Для использования бактериального протеина для гена редактируя, научные работники должны оптимизировать некоторые аспекты метода. Они конструировали короткую последовательность ДНА немедленно после последовательности ДНА пристрелнной Cas9, вызванным Protospacer Смежным Мотивом (PAM). Каждому различному Cas9 нужна специфическая последовательность PAM, в противном случае оно не будет связать к и расколоть последовательность ДНА цели. Secondly, они должны доработать длину РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ направляющего выступа.

Потом, научные работники IBS упаковали новый комплекс CRISPR-Cas9 в AAV, вместе с 2 направляющим выступом RNAs и дневным протеином репортера, для того чтобы видоизменить гены в мышцах и глазах мышей. Они сконцентрировали на 2 генах, котор включили в врем-родственное macular вырождение (AMD), одну из причин водя слепоты в взрослых. Один ген общяя терапевтическая цель для ADM, вызванная Васкулярн эндотелиальным фактором роста A (VEGF A), другой один фактор транскрипции который активирует transcripction VEGF A и как HIF-1a. Не Похож На VEGF A, HIF-1a не было рассмотрено как цель снадобья. So-called'undruggable'genes, как транскрипция факторизует вообще, не может быть пристрелно сразу антителами и другими биологическими или химическими снадобьями. В этом изучении, научно-исследовательская группа доказала что CjCas9 поставленное к сетчатке через AAV может деактивировать Hif1a и VEGF A в мышах эффективно и уменьшила зону choroidal neovascularization (CNV).

Внутриглазные впрыски AAV-упакованного CRISPR-CjCas9 смогли быть полезны для того чтобы обработать различные ретинальные заболевания и внутрирастительные заболевания. «CjCas9 сильно специфическо и не причиняет перегласовки -цели в геноме,» объясняет КИМ Jin-Soo.

Последовательности цели гена Hif1a эти же в обеих мышах и люди, таким образом метод представленный в этом изучении смогли быть использованы в будущем для обработки ADM в людских пациентах. Путем вымощать путь к применению CjCas9 против «undruggable» генов или последовательностей non-кодирвоания, эта технология может расширить ряд терапевтических целей, делая весь людской геном потенциально druggable.

Источник: http://www.ibs.re.kr/cop/bbs/BBSMSTR_000000000738/selectBoardArticle.do?nttId=14255

Advertisement