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Utilisant la cytométrie de flux pour diagnostiquer des immunodéficiences primaires (PIDs)

Les chercheurs de l'université de Fribourg, Allemagne ont développé une méthode basée sur cytométrie de flux fonctionnel pour le diagnostic des immunodéficiences primaires innées (PIDs). La technique a été appliquée aux monocytes, le leucocyte modèle du système immunitaire inné.

cytométrie de fluxCrédits d'image : Chansom Pantip/Shutterstock.com

Le test est instrumental car il peut fournir l'expression de cytokines de l'information c.-à-d. et l'activation fonctionnelles de voie de signalisation ainsi qu'indiquer la présence ou l'absence des cellules immunitaires elles-mêmes en temps opportun qui avisent la prise de décision clinique.

La cytométrie de flux fonctionnelle de monocyte offre une alternative à diagnostiquer des immunodéficiences primaires innées utilisant les analyses qui déterminent la concentration des cytokines sur des ELISA ou le titre viral ; ceux-ci n'offrent pas des moyens du réglage pour le nombre de cellules sensibles dans chaque échantillon. C'est particulièrement utile pour les patients qui ont des variantes d'importance incertaine (VUS).

VUS sont des formes variables d'un gène qui ont été recensées par le dépistage génétique, avec un effet indéterminé sur la santé de l'organisme. Faute d'analyses fonctionnelles validées pour des défectuosités immunisées innées, la cytométrie de flux est un outil de valeur.

L'équipe a adapté la cytométrie de flux expérimentale normale actuelle de monocyte aux fins de valider leur application dans les flux de travail qui sont employés pour diagnostiquer des immunodéficiences primaires innées. Pour faire ainsi, l'équipe a diagnostiqué les échantillons patients avec des patients manifestant une gamme des déficits. Premièrement, pour des patients présentant des défectuosités dans les voies comme un péage de récepteur et de signalisation NOD2.

L'équipe a exécuté une analyse qui a mesuré la production de TNF. Type, les patients dans cette condition expliquent la production réduite de TNF en réponse à la stimulation par le lipopolysaccharide (LPS) et le L18-MDP. MDP est un dérivé synthétique du dipeptide de muramyl, qui est un constituant peptidoglycan de grampositif et des bacilles gram négatifs et peut obtenir une réaction inflammatoire.

L'équipe a également employé cette analyse dans les patients avec la maladie inflammatoire de l'intestin de tôt-début ou avec l'inhibiteur soupçonné de X-linked du déficit de l'apoptose (XIAP).

Pour diagnostiquer un déficit en réponse nui à IL-10, l'équipe a adapté l'analyse en príncubant l'échantillon avec IL-10 ; ceci évite la production du TNF en général induite par des LPS. En conclusion, pour recenser des patients présentant des défectuosités dans la voie de signalisation d'interféron du type I déserte l'équipe a employé une analyse basée par cytométrie de flux.

Cet impliqué l'incubation des cellules mononucléaires périphériques de sang (PMBCs) avec l'augmentation des concentrations d'IFN-a. Après ceci, des cellules ont été resuspendues dans un support contenant le virus recombiné de stomatite vésiculaire (VSV) qui ont été conçues pour exprimer une protéine fluorescente verte (GFP), produisant de VSV-GFP.

En réponse à la stimulation d'IFN-a, la fraction de PMBCs qui a souillé pour le GFP a été prise pendant qu'une mesure d'activité d'interféron du type I. Supporté une réduction stable du nombre de cellules GFP-positives à moins de 20% a été pris comme confirmation des donneurs sains sans des immunodéficiences.

Pour diagnostiquer des patients présentant une réaction nuie à IL-10, l'équipe a príncubé des cellules avec la cytokine à la concentration croissante. Une réduction de production de TNF a été mesurée. Ils exécutent le même essai dans les patients avec la maladie inflammatoire de l'intestin de tôt-début. Les résultats ont été validés utilisant des séquences génétiques pour des mutations dans les gènes réglant pour les récepteurs IL-10.

L'équipe a également exécuté trois analyses de cytométrique de flux de monocyte qui ont produit des résultats reproductibles indiquant que les patients ont souffert de la perte de mutations de fonctionnement dans les médiateurs de la signalisation immunisée sur les surfaces des cellules.

Ces résultats ont été corroborés utilisant l'analyse de l'inhibition IL-10, l'analyse d'IFN-a qui trouve le déficit de récepteur d'IFN-a/b et l'analyse de L18-MDP qui indique un déficit dans la kinase complexe et récepteur-agissante l'un sur l'autre 2. d'ensemble de réseau d'ubiquitine de sérine/thréonine. Cependant, ces tests exigent la validation, et les tests tellement fonctionnels qui déterminent l'intégrité de l'offre immunisée de voies de signalisation plusieurs avantages.

Premièrement, ils peuvent renvoyer des résultats entre 24-48 heures, qui est pertinent pour les professionnels de la santé qui doivent prendre des décisions de demande de règlement. Deuxièmement, les résultats obtenus sont fonctionnels, à la différence de dans le cas de VUS dont les effets fonctionnels exigent la confirmation.

Troisièmement, les tests fonctionnels peuvent questionner la totalité de la voie de signalisation et peuvent comprendre les molécules qui ne sont pas type comprises dans le répertoire des protéines prises pour être indicatives d'une immunodéficience primaire innée. En soi, ils ne sont pas exclus ; type, l'ordonnancement et l'analyse entiers-exome de gène candidat manqueront ces molécules.

En conclusion, le coût d'analyse fonctionnelle comme offert par cytométrie de flux est souvent inférieur comme coût de personnel et de traitement de données. La note d'Elling et autres que le désavantage de ces résultats fonctionnels est leur confiance dans la confirmation génétique (par opposition à fonctionnel), mais cette confiance est plus facile quand la cytométrie de flux fonctionnelle est exécutée en tant qu'élément d'une voie de diagnostic.

En conclusion, les analyses qui sont présentées par la robustesse et la fiabilité d'offre de groupe qui s'assurent que des décisions cliniques prises peuvent être faites ont ainsi basé sur des résultats fonctionnels.

Source

2020) cytométries de flux fonctionnelles d'Amman S. et autres (des monocytes pour le diagnostic courant des immunodéficiences primaires innées. Allergie Clin Immunol de J. DOI : 10.1016/j.jaci.2019.09.002.

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Last Updated: Mar 12, 2020

Hidaya Aliouche

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Hidaya Aliouche

Hidaya is a science communications enthusiast who has recently graduated and is embarking on a career in the science and medical copywriting. She has a B.Sc. in Biochemistry from The University of Manchester. She is passionate about writing and is particularly interested in microbiology, immunology, and biochemistry.

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