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Usando el Cytometry de flujo para diagnosticar inmunodeficiencias primarias (PIDs)

Los investigadores de la universidad de Friburgo, Alemania han desarrollado un método cytometry-basado flujo funcional para la diagnosis de inmunodeficiencias primarias naturales (PIDs). La técnica fue aplicada a los monocitos, el leucocito modelo del sistema inmune natural.

cytometry de flujoHaber de imagen: Chansom Pantip/Shutterstock.com

La prueba es instrumental pues puede ofrecer la expresión del cytokine de la información es decir y la activación funcionales del camino de la transmisión de señales e indicar la presencia o la ausencia de las células inmunes ellos mismos a tiempo que informan a la toma de decisión clínica.

El cytometry de flujo funcional del monocito ofrece una opción a diagnosticar inmunodeficiencias primarias naturales usando los análisis que determinan la concentración de cytokines en ELISAs o título viral; éstos no ofrecen medios de controlar para el número de células responsivas en cada muestra. Esto es especialmente útil para los pacientes que tienen variantes de la significación incierta (VUS).

VUS son las formas variables de un gen que se han determinado con pruebas genéticas, con un efecto indeterminado sobre la salud del organismo. En ausencia de los análisis funcionales validados para los defectos inmunes naturales, el cytometry de flujo es una herramienta valiosa.

Las personas adaptaron cytometry de flujo experimental estándar actual del monocito con el propósito de validar su uso en los flujos de trabajo que se utilizan para diagnosticar inmunodeficiencias primarias naturales. Para hacer así pues, las personas diagnosticaron muestras pacientes con los pacientes que visualizaban un alcance de deficiencias. En primer lugar, para los pacientes con defectos en peaje-como el receptor y caminos de la transmisión de señales NOD2.

Las personas realizaron un análisis que midió la producción de TNF. Típicamente, los pacientes con esta condición demuestran la producción reducida de TNF en respuesta al estímulo por el lipopolysaccharide (LPS) y L18-MDP. MDP es un derivado sintetizado del dipéptido del muramyl, que es un componente peptidoglycan de bacterias grampositivas y gramnegativas y puede sacar una reacción inflamatoria.

Las personas también utilizaron este análisis en pacientes con el síndrome del intestino irritable del temprano-inicio o con el inhibidor X-conectado sospechoso de la deficiencia del apoptosis (XIAP).

Para diagnosticar una deficiencia en una reacción empeorada a IL-10, las personas adaptaron el análisis preincubando la muestra con IL-10; esto previene la producción de TNF inducido típicamente por los LPS. Finalmente, determinar a pacientes con defectos en el tipo camino de la transmisión de señales del interferón de I deserta a las personas utilizó un análisis basado flujo-cytometry.

Esto implicó la incubación de las células mononucleares de la sangre periférica (PMBCs) con el aumento de las concentraciones de IFN-a. Después de esto, las células fueron suspendidas de nuevo en un ambiente que contenía el virus recombinante de la estomatitis vesicular (VSV) que fueron dirigidas para expresar una proteína fluorescente verde (GFP), generando VSV-GFP.

En respuesta al estímulo de IFN-a, la fracción de PMBCs que manchó para GFP fue tomada como dimensión de tipo actividad del interferón de I. Continuo una reducción estable en el número de células GFP-positivas a menos el de 20% fue tomado como confirmación de donantes sanos sin inmunodeficiencias.

Para diagnosticar a pacientes con una reacción empeorada a IL-10, las personas preincubaron las células con el cytokine en la concentración cada vez mayor. Una reducción en la producción de TNF fue medida. Realizan el mismo ensayo en pacientes con el síndrome del intestino irritable del temprano-inicio. Los resultados fueron validados usando las series genéticas para las mutaciones en los genes que controlaban para los receptores IL-10.

Las personas también realizaron tres análisis cytometric del flujo del monocito que produjeron los resultados reproductivos que indicaban que los pacientes sufrieron de la baja de las mutaciones de la función en mediadores de la transmisión de señales inmune en las superficies de células.

Estos resultados fueron corroborados usando el análisis de la inhibición IL-10, el análisis de IFN-a que descubre deficiencia del receptor de IFN-a/b y el análisis de L18-MDP que revela una deficiencia en la cinasa compleja y receptor-que obra recíprocamente 2. del montaje de la cadena del ubiquitin de la serina/de la treonina. Sin embargo, estas pruebas requieren la validación, y las pruebas tan funcionales que determinan la integridad de la oferta inmune de los caminos de la transmisión de señales varias ventajas.

En primer lugar, pueden volver resultados entre 24-48 horas, que es pertinente para los profesionales de la atención sanitaria que deben tomar decisiones del tratamiento. En segundo lugar, los resultados obtenidos son funcionales, a diferencia en el caso de VUS cuyos efectos funcionales requieran la confirmación.

En tercer lugar, las pruebas funcionales pueden preguntar el conjunto del camino de la transmisión de señales y pueden incluir las moléculas que no se incluyen típicamente en el repertorio de las proteínas tomadas para ser indicativas de una inmunodeficiencia primaria natural. Como tal, no se excluyen; típicamente, la secuencia y el análisis enteros-exome del gen del candidato faltarán estas moléculas.

Finalmente, el costo de análisis funcional según lo ofrecido por cytometry de flujo es a menudo más inferior como el costo de personales y de la informática. La nota de Elling y otros que la desventaja de estos resultados funcionales es su confianza en la confirmación genética (en comparación con funcional), solamente esta confianza es más fáciles cuando el cytometry de flujo funcional se realiza como parte de un camino de la diagnosis.

En conclusión, los análisis que son presentados por la robustez y la confiabilidad de la oferta del grupo que se aseguran de que las decisiones clínicas tomadas puedan ser hechas basaron tan en resultados funcionales.

Fuente

2020) cytometry de flujo funcionales de Amman S. y otros (de los monocitos para la diagnosis rutinaria de inmunodeficiencias primarias naturales. Alergia Clin Immunol de J. DOI: 10.1016/j.jaci.2019.09.002.

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Last Updated: Mar 12, 2020

Hidaya Aliouche

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Hidaya Aliouche

Hidaya is a science communications enthusiast who has recently graduated and is embarking on a career in the science and medical copywriting. She has a B.Sc. in Biochemistry from The University of Manchester. She is passionate about writing and is particularly interested in microbiology, immunology, and biochemistry.

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