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Une approche basée sur FACS nouvelle à la concentration d'Isoagglutinin dans les produits pour l'usage intraveineux

Un organisme de recherche, financé par CSL Behring et abouti par Marc Bürzle, ont publié un papier en lequel ils décrivent une méthode trier (FACS) fluorescence-activée de cellules pour la quantification d'isoagglutinin.

Immunoglobulines

Crédit d'image : Utas7777777/Shutterstock.com

Cette méthode de FACS offre des moyens plus précis de mesurer des immunoglobulines pour l'application intraveineuse et confirme des différences dans des produits d'immunoglobuline intraveineuse.

Des molécules d'Isoagglutinins trouvées dans des produits (IVIG) d'immunoglobuline intraveineuse sont liées à une hémolyse appelée de processus, rompre des hématies. Isoagglutinins sont des anticorps qui stimulent le ` collant ensemble' ou agglutinement des hématies et sont type le groupe A d'anti-sang et les anticorps de B.

En soi, la connaissance du numéro de l'isoagglutinin est nécessaire pour régler leurs niveaux et pour déterminer leur corrélation avec des événements hémolytiques.

La quantification précédente de l'isoagglutinin a été donnée par la pharmacopée européenne (Ph.Eur.) dans une analyse directe et depuis considérée la norme pour évaluer des niveaux d'isoagglutinin dans des produits d'IVIG. Dans cette analyse, les échantillons d'IVIG sont sujets à des hématies papaïne-ont traité1 d'A ou de B groupe sanguin (RBCs), après quoi le niveau de l'agglutinement est conçu.

L'agglutinement est mesuré par une cellule-configuration avec laquelle est produit sur des dilutions doubles des produits d'IVIG mélangés a +/- une opération de titre. Les résultats sont variables, avec des concentrations réelles entre la moitié autant que le résultat de test et la double valeur. En conséquence, il est difficile déterminer la corrélation entre le niveau d'isoagglutinin et l'hémolyse.

L'étude

Le groupe, dirigé par Marc Bürzle, a développé la méthode basée sur FACS qui peut mesurer le niveau d'isoagglutinin au niveau d'IVIG avec une plus haute précision que le courant Ph/Eur. analyse directe. Cette approche basée sur FACS examine une méthodologie donnée par Gerber et autres, en plus d'une norme externe et d'un essai biologique.

Ceci comprend évaluer plusieurs concentrations d'une suite d'échantillons de norme et de test pour la comparaison de la similitude entre eux - la similitude est une supposition essentielle pour l'analyse d'essai biologique. Les essais biologiques sont utilisés généralement dans le desserrage des produits médicamenteux et des clichés intermédiaires et des formules de caractérisation.

L'état de groupe résulte d'une gamme d'IVIG et de produits sous-cutanés (SCIG) d'immunoglobuline comme déterminée par l'évaluation des niveaux d'isoagglutinin. Cette méthode a également révisé le procédé du procédé de production d'IVIG. Au commencement, des dons des donneurs avec des titres élevés d'anti-A ont été exclus ; une opération plus efficace de chromatographie (IAC) d'immunoaffinity remonte ceci.

L'IAC réduit l'anti-A et les anti-b anticorps avec le choc minimal sur des spécificités d'anticorps dans le produit fini sans entraîner la perte de toute la concentration d'IgG.

Méthode

Pour réaliser ceci, des hématies (RBCs), les globules rouges, positifs pour les antigènes A1 et B et négatif pour le ccddee de main droite ont été employés de trois donneurs de SRK inter-régionaux AG, Berne, Suisse de Blutspende.

Des phénotypes de l'A1 et du B GR ont été vérifiés utilisant un test pour vérifier l'agglutinement utilisant l'anti-A et les anti-b anticorps respectivement. L'analyse de FACS a été exécutée par un cytometer de contrôle de flux, et à partir de chaque échantillon d'IVIG (norme ou contrôle), un ensemble de 3 concentrations ont été produits en raison de deux dilutions séquentielles doubles indépendantes.

Chacune des solutions de contrôle a été incubée pendant une heure d'une plaque de microtitre, et après incubation, chacune des plaques de microtitre a été centrifugée et de nouveau sujet à l'incubation. Après ce deuxième rond de l'incubation hé PBS le tampon a été ajouté, et l'intensité médiane de fluorescence de chaque solution de test a été mesurée par l'intermédiaire de la cytométrie de flux.

Résultats

Le début expliqué par résultats la quantification des produits de l'isoagglutinin IGIV a pu être déterminé haute précision. Relativement à l'analyse directe d'EUR de pH, cette méthode neuve montre moins de variabilité - c'est à cause des points finaux sur l'analyse plus ancienne mesurée sur une échelle discrète, à basse résolution. Puisque cette analyse est basée sur FACS, les résultats sont continus (ainsi qu'électroniques et objectifs) et peuvent compenser l'effet avec l'EUR de pH.

En raison de la lecture objective de l'analyse de FACS. les résultats sont automatisés et traités électroniquement, évitant l'évaluation objective requise dans l'EUR de pH. analyse. L'essai neuf de l'équipe pouvait également différencier entre différents niveaux d'isoagglutinin dans les produits disponibles dans le commerce d'IVIG vérifiés, ainsi que dans les produits avant et après être sujet aux stratégies de réduction d'isoagglutinin.

L'analyse était assez sensible pour pouvoir trouver la variabilité actuelle dans le même lot. Avant tout, l'analyse de Bürzle et autres pouvait expliquer qu'il y a potentiellement cliniquement des différences importantes entre les produits d'IVIG, cependant, dus à un manque par contrôle d'échantillon représentatif, des conclusions au sujet des quantités d'isoagglutinin ne pourrait pas être formée.

En plus de ceci, quand l'équipe a exécuté l'examen critique et l'exclusion des échantillons ou d'employer l'opération de réduction d'agglutinement d'IAC, les niveaux d'anti-A dans le produit d'IVIG étaient réduits.

L'utilisation de l'opération de réduction d'IAC a réduit les niveaux à ceux assimilé vus suivre la vieille méthode de fractionnement comme Cohn d'éthanol, dans laquelle la majorité d'isoagglutinin sont réparties en fraction.

Actuellement, les niveaux de l'anti-A et anti B doivent être égaux à ou inférieur le contrôle - le résultat du contrôle des groupes IVIG prouve que quelqu'un des concentrations dans les produits sont plus élevé que 100% de la norme.

L'acceptabilité du desserrage de ces produits est due à la variabilité utilisant la vieille analyse directe d'EUR de pH. Le groupe propose qu'en mettant en application l'analyse neuve, le desserrage des lots avec des niveaux plus élevés d'isoagglutinin soit évité, par conséquent augmenter la raideur du cahier des charges.

Bürzle et collègues ont identifié que leur méthode a été limitée parce que la teneur en isoagglutinin du matériau normal n'a pas été connue. En outre, il n'y a aucune préparation internationale de référence actuelle pour l'anti-A et l'anti-b quantification.

Comme résultat, des concentrations d'isoagglutinin peuvent seulement être exprimées relativement à une norme. De plus, le test ce n'est pas le détail 100% pour chacun des anticorps, et l'équipe ne peut pas exclure la présence des anticorps de non-ABO grippant à d'autres antigènes de GR - ce sont les anticorps irréguliers appelés.

L'équipe a exclu la cotisation des anticorps irréguliers basés sur le fait qu'il y avait une forte corrélation entre l'analyse directe d'EUR de pH et la méthode basée sur FACS, cependant.

Future recherche

Tandis que la recherche précédente sur la corrélation entre l'isoagglutinin nivelle dans des produits d'IVIG et le risque d'hémolyse manque, l'approche basée par FACS donne l'occasion d'améliorer ceci. C'est parce que les méthodes précédentes ne pourraient pas mesurer avec la précision.

Au total, cette analyse basée sur FACS neuve tient compte de la quantification de l'isoagglutinin dans les produits fabriqués utilisant les produits basés sur chromatographie et parfractionnement basés, en plus du rendement de la réduction d'isoagglutinin en raison de l'IAC.

La haute précision accordée par cette méthode est espérée pour avoir comme conséquence des caractéristiques plus rigoureuses d'isoagglutinin pour des produits, ainsi que pouvoir vérifier la corrélation entre l'hémolyse et le teneur d'isoagglutinin dans des produits d'IVIG.

Le financement

Ce travail a été financé par CSL Behring.

Déclaration de la concurrence pour l'intérêt

Tous les auteurs sont actuel, ou étaient précédemment, employé par CSL Behring, les bailleurs de fonds de cette recherche. En outre, Alphonse Hubsch et Dominik Stadler possèdent des parts de CSL. Il n'y a aucun autre conflit d'intérêts à enregistrer.

Remerciements

Le support éditorial a été fourni par Meridian HealthComms Ltd, financé par CSL Behring.

Source

Bürzle, mesure de M. et autres d'isoagglutinin en immunoglobulines pour l'application intraveineuse par cytométrie de flux. Biochimies analytiques. 2019. DOI : https://doi.org/10.1016/j.ab.2019.113534

Further Reading

Last Updated: Jan 31, 2020

Hidaya Aliouche

Written by

Hidaya Aliouche

Hidaya is a science communications enthusiast who has recently graduated and is embarking on a career in the science and medical copywriting. She has a B.Sc. in Biochemistry from The University of Manchester. She is passionate about writing and is particularly interested in microbiology, immunology, and biochemistry.

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    Aliouche, Hidaya. (2020, January 31). Une approche basée sur FACS nouvelle à la concentration d'Isoagglutinin dans les produits pour l'usage intraveineux. News-Medical. Retrieved on September 16, 2021 from https://www.news-medical.net/life-sciences/A-Novel-FACS-based-Approach-to-Isoagglutinin-Concentration-in-Products-for-Intravenous-Use.aspx.

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