Chromatographie d'affinité - comment fonctionne-t-cela ?

La chromatographie d'affinité est un procédé de séparation employé pour épurer des molécules ou un groupe de molécules qui sont dans un mélange biochimique. Elle utilise deux phases ; une phase stationnaire et une phase mobile. Les molécules spécifiques de la phase mobile colleront sur la phase stationnaire basée sur leurs propriétés tandis que le reste de la solution réussissant par inchangé.

Le procédé est employé souvent pour épurer des biomolécules tels que des enzymes, des anticorps, et des protéines recombinées. Il peut également aider à éliminer des substances nocives telles que des agents pathogènes par les mêmes principes.

Par exemple, une protéine dans une solution peut être épurée en la réussissant par un fléau qui a une autre molécule fixée à elle (le ligand) qui a une affinité pour la protéine. Quand ils grippent, ceci permettra à la solution non réactive et liée par non de réussir par le fléau. La molécule-cible est alors éluée du ligand par un changement effectué des conditions de tampon de sorte que la protéine puisse être enlevée de cette surface.

Le procédé concerne habituellement des ensembles de molécules qui agissent l'un sur l'autre avec leur associé apparenté tel que des enzymes et des substrats, des antigènes et des anticorps, et ligands et récepteurs. Ainsi la purification exige la connaissance de la façon dont les deux ensembles différents de molécules sont susceptibles d'agir l'un sur l'autre.

Phase stationnaire

Les scientifiques ont plusieurs options pour la phase stationnaire :

  • Supports poreux - les matières employées comprennent l'agarose, cellulose, silice, le polymethacrylate qui peut être obtenu dans différentes tailles de pore
  • Supports non poreux - ceux-ci tendent à avoir des surfaces inférieures par rapport à poreux bien qu'elles puissent mener à une purification plus rapide
  • Supports monolithiques - ceux-ci combinent grand et petit traversez les pores
  • Membranes - ceux-ci peuvent être employés pour des purifications plus rapides mais elles ont une surface réduite due à un manque de porosité
  • absorbants d'Augmenter-bâti - ces objectif pour empêcher le fléau de chromatographie d'être encrassé
  • Les medias de perfusion (traversez les talons) - ceux-ci ont différents pores classés

La dimension particulaire des sujets de support. De plus petites molécules peuvent avoir comme conséquence une surface plus grande mais il y a une possibilité plus grande de l'accumulation et des odeurs désagréables de contaminant avec ces derniers. De plus grandes particules peuvent contrer ces difficultés et ainsi sont employées souvent comme alternative.

Il est important que la phase stationnaire choisie ne soit pas attrayante à aucune molécule dans la solution autre que celle exigée pour la purification. Il doit être chimiquement stable et avoir une certaine incapacité de gripper aux types variés de solutions qui seront réussies par elle telle que des enzymes, des produits d'épuration et des tampons d'élution. La structure elle-même doit être intense pour supporter les nombreuses procédures de purification qui sont susceptibles d'être exécutées.

Ligands

Il y a différentes options pour les ligands qui grippent à la substance qui les besoins d'être épuré :

  • Anticorps - ceux-ci peuvent être monoclonaux ou polyclonaux. L'avantage de eux est leur spécificité élevée et grande constante d'obligatoire
  • ADN - ceci peut être employé pour des polymérases, des protéines ADN-grippantes, des hélicases et des enzymes de restriction
  • Molécules aromatiques polysulfanated par chlorotriazine - ceux-ci sont employés pour des molécules telles que des lyases, hydrolases, enzymes glycotic, oxydoréductases
  • Ligands biométriques de teinture - ceux-ci peuvent être employés pour la purification de protéine
  • Peptide - ceux-ci sont employés pour des biomolécules

Les compagnies telles qu'AMSBIO ont une gamme de différents matériaux à aider avec la chromatographie d'affinité.

Références

[Davantage de relevé : Chromatographie]

Last Updated: Feb 26, 2019

Deborah Fields

Written by

Deborah Fields

Deborah holds a B.Sc. degree in Chemistry from the University of Birmingham and a Postgraduate Diploma in Journalism qualification from Cardiff University. She enjoys writing about the latest innovations. Previously she has worked as an editor of scientific patent information, an education journalist and in communications for innovative healthcare, pharmaceutical and technology organisations. She also loves books and has run a book group for several years. Her enjoyment of fiction extends to writing her own stories for pleasure.

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