Cromatografia di affinità - come funziona?

La cromatografia di affinità è un trattamento della separazione usato per depurare le molecole o un gruppo di molecole che sono in una miscela biochimica. Impiega due fasi; una fase stazionaria e una fase mobile. Le molecole specifiche a partire dalla fase mobile salderanno alla fase stazionaria basata sui loro beni mentre il resto della soluzione che passa con inalterato.

Il trattamento è usato spesso depurare le biomolecole quali gli enzimi, gli anticorpi e le proteine recombinanti. Può anche contribuire ad eliminare le sostanze nocive quali gli agenti patogeni con gli stessi principi.

Per esempio, una proteina in una soluzione può essere depurata passandola attraverso una colonna che ha altra molecola fissata a (il legante) che ha un'affinità per la proteina. Quando legano, questo permetterà che alla la soluzione non reattiva e diretta non passi attraverso la colonna. La molecola dell'obiettivo poi è eluita dal legante da un cambiamento fatto negli stati del buffer in moda da potere eliminare la proteina da quella superficie.

Il trattamento comprende solitamente gli insiemi delle molecole che interagiscono con il loro partner della parola affine quali gli enzimi e substrati, antigeni ed anticorpi e leganti e ricevitori. Così la depurazione richiede la conoscenza di come i due insiemi differenti delle molecole sono probabili interagire.

Fase stazionaria

Gli scienziati hanno parecchie opzioni per la fase stazionaria:

  • Supporti porosi - i materiali utilizzati includono l'agarosi, la cellulosa, la silice, polymethacrylate che può essere ottenuto in dimensioni differenti del poro
  • Supporti non porosi - questi tendono ad avere aree dell'intradosso rispetto a poroso sebbene possano piombo a depurazione più veloce
  • Supporti monolitici - questi combinano sia grande che piccolo attraversi i pori
  • Membrane - questi possono essere usati per le depurazioni più rapide ma hanno un'area diminuita dovuto una mancanza di porosità
  • sostanze assorbenti del Espandere-letto - queste scopo per impedire la colonna di cromatografia l'ostruzione
  • I media di aspersione (attraversi le perle) - questi hanno pori graduati differenti

La dimensione delle particelle degli argomenti di sostegno. Le più piccole molecole possono provocare la maggior area ma c'è una maggior probabilità di capitalizzazione dell'agente inquinante e degli odori sgradevoli con questi. Le più grandi particelle possono ricambiare queste difficoltà ed in modo da sono usate spesso come alternativa.

È importante che la fase stazionaria scelta non è attraente ad alcuna molecola nella soluzione all'infuori di quella richiesta per depurazione. Deve essere chimicamente stabile ed avere certa incapacità di legare ai vari tipi di soluzioni che saranno passate con quali gli enzimi, gli agenti di sgrassatura ed i buffer dell'eluizione. La struttura stessa deve essere forte resistere alle molte procedure di depurazione che sono probabili essere eseguite.

Leganti

Ci sono opzioni differenti per i leganti che legano alla sostanza che necessità di essere depurato:

  • Anticorpi - questi possono essere monoclonali o policlonali. Il vantaggio di loro è la loro alta specificità e grande costante dell'associazione
  • DNA - questo può essere usato per le polimerasi, le proteine dell'DNA-associazione, i helicases e gli enzimi della restrizione
  • Molecole aromatiche polysulfanated clorotriazina - questi sono usati per le molecole quali le liasi, le idrolasi, gli enzimi glycotic, ossidoriduttasi
  • Leganti biometrici della tintura - questi possono essere usati per depurazione della proteina
  • Peptide - questi sono usati per le biomolecole

Le società quale AMSBIO hanno un intervallo dei materiali differenti da aiutare con la cromatografia di affinità.

Riferimenti

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Last Updated: Feb 26, 2019

Deborah Fields

Written by

Deborah Fields

Deborah holds a B.Sc. degree in Chemistry from the University of Birmingham and a Postgraduate Diploma in Journalism qualification from Cardiff University. She enjoys writing about the latest innovations. Previously she has worked as an editor of scientific patent information, an education journalist and in communications for innovative healthcare, pharmaceutical and technology organisations. She also loves books and has run a book group for several years. Her enjoyment of fiction extends to writing her own stories for pleasure.

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