Cromatografia de afinidade - como trabalha?

A cromatografia de afinidade é um processo da separação usado para refinar moléculas ou um grupo de moléculas que estão em uma mistura bioquímica. Emprega duas fases; uma fase estacionária e uma fase móvel. As moléculas específicas da fase movente ligar-se-ão à fase estacionária baseada em suas propriedades enquanto o resto da solução que passa com não afectado.

O processo é usado frequentemente refinar biomoléculas tais como enzimas, anticorpos, e proteínas de recombinação. Pode igualmente ajudar a remover as substâncias prejudiciais tais como os micróbios patogénicos com os mesmos princípios.

Por exemplo, uma proteína em uma solução pode ser refinada passando a através de uma coluna que tenha uma outra molécula anexada a ela (a ligante) que tem uma afinidade para a proteína. Quando ligam, este permitirá que a unreactive, solução do não-limite passe através da coluna. A molécula do alvo eluted então da ligante por uma mudança feita nas condições do amortecedor de modo que a proteína possa ser removida dessa superfície.

O processo envolve geralmente grupos de moléculas que interagem com seu sócio cognate tal como enzimas e carcaças, antígenos e anticorpos, e ligantes e receptors. Assim a purificação exige o conhecimento de como os dois grupos diferentes de moléculas são prováveis interagir.

Fase estacionária

Os cientistas têm diversas opções para a fase estacionária:

  • Apoios porosos - os materiais usados incluem o agarose, celulose, silicone, o polymethacrylate que pode ser obtido em tamanhos diferentes do poro
  • Apoios não porosos - estes tendem a ter áreas do intradorso em comparação com poroso embora possam conduzir a uma purificação mais rápida
  • Apoios monolíticos - estes combinam grande e pequeno corra através dos poros
  • Membranas - estes podem ser usados para umas purificação mais rápidas mas têm uma área de superfície reduzida devido a uma falta da porosidade
  • absorventes da Expandir-base - estes alvo para impedir que a coluna de cromatografia esteja obstruída acima
  • Os media da perfusão (corra através de grânulos) - estes têm os poros feitos sob medida diferentes

O tamanho de partícula das matérias do apoio. As moléculas menores podem conduzir à maior área de superfície mas há uma possibilidade maior da acumulação do contaminador e de odores desagradáveis com estes. As partículas maiores podem opr estas dificuldades e assim que são usadas frequentemente como uma alternativa.

É importante que a fase estacionária escolhida não é atractiva a nenhuma molécula na solução a não ser essa exigida para a purificação. Precisa de ser quimicamente estável e de ter alguma incapacidade ligar aos vários tipos de soluções que serão passadas com ela tal como enzimas, agentes de limpeza e amortecedores da eluição. A estrutura própria precisa de ser forte suportar muitos procedimentos da purificação que são prováveis ser executados.

Ligantes

Há umas opções diferentes para as ligantes que ligam à substância que necessidades de ser refinado:

  • Anticorpos - estes podem ser monoclonais ou polyclonal. O benefício deles é suas especificidade alta e grande constante do emperramento
  • ADN - isto pode ser usado para polimerases, proteínas ADN-obrigatórias, helicases e enzimas da limitação
  • Moléculas aromáticas polysulfanated Chlorotriazine - estes são usados para moléculas tais como lyases, hidrolase, enzimas glycotic, oxidorredutase
  • Ligantes biométricas da tintura - estes podem ser usados para a purificação da proteína
  • Peptide - estes são usados para biomoléculas

As empresas tais como AMSBIO têm uma escala dos materiais diferentes a ajudar com cromatografia de afinidade.

Referências

[Leitura adicional: Cromatografia]

Last Updated: Feb 26, 2019

Deborah Fields

Written by

Deborah Fields

Deborah holds a B.Sc. degree in Chemistry from the University of Birmingham and a Postgraduate Diploma in Journalism qualification from Cardiff University. She enjoys writing about the latest innovations. Previously she has worked as an editor of scientific patent information, an education journalist and in communications for innovative healthcare, pharmaceutical and technology organisations. She also loves books and has run a book group for several years. Her enjoyment of fiction extends to writing her own stories for pleasure.

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