¿Cromatografía de afinidad - cómo trabaja?

La cromatografía de afinidad es un proceso de la separación usado para purificar moléculas o un grupo de las moléculas que están en una mezcla bioquímica. Emplea dos fases; una fase estacionaria y una fase movible. Las moléculas específicas a partir de la fase móvil pegarán a la fase estacionaria basada en sus propiedades mientras que el descanso de la solución que pasa con inafectado.

El proceso es de uso frecuente purificar biomoléculas tales como enzimas, anticuerpos, y proteínas recombinantes. Puede también ayudar a quitar substancias nocivas tales como patógeno con los mismos principios.

Por ejemplo, una proteína en una solución puede ser purificada pasándola a través de una olumna que tenga otra molécula sujetada a ella (el ligand) que tenga una afinidad para la proteína. Cuando atan, éste permitirá que el unreactive, solución del no-salto pase a través de la olumna. La molécula del objetivo entonces es enjuagada del ligand por un cambio realizado en las condiciones del almacenador intermedio para poder quitar la proteína de esa superficie.

El proceso implica generalmente equipos de las moléculas que obran recíprocamente con su socio cognado tal como enzimas y los substratos, los antígenos y los anticuerpos, y los ligands y los receptores. Así la purificación requiere conocimiento de cómo los dos diversos equipos de moléculas son probables obrar recíprocamente.

Fase estacionaria

Los científicos tienen varias opciones para la fase estacionaria:

  • Apoyos porosos - los materiales usados incluyen la agarosa, celulosa, sílice, el polymethacrylate que se puede obtener en diversas tallas del poro
  • Apoyos no porosos - éstos tienden a tener superficies más inferiores con respecto a poroso aunque puedan llevar a una purificación más rápida
  • Apoyos monolíticos - éstos combinan grande y pequeño atraviese los poros
  • Membranas - éstos se pueden utilizar para purificaciones más rápidas pero tienen una superficie reducida debido a una falta de porosidad
  • absorbentes de la Desplegar-base - estos objetivo para evitar que la olumna de cromatografía sea obstruida
  • Los ambientes de la perfusión (atraviese las molduras) - éstos tienen diversos poros clasificados

La talla de partícula de las materias del apoyo. Moléculas más pequeñas pueden dar lugar a mayor superficie pero hay una mayor ocasión de la acumulación del contaminante y de los olores desagradables con éstos. Partículas más grandes pueden contradecir estas dificultades y así que son de uso frecuente como opción.

Es importante que la fase estacionaria elegida no es atractiva a ninguna molécula en la solución con excepción de la que está requerida para la purificación. Necesita ser químicamente estable y tener cierta incapacidad para atar a los diversos tipos de soluciones que sean pasadas con ella tal como enzimas, agentes de limpieza y almacenadores intermedios de la elución. La estructura sí mismo necesita ser fuerte soportar los muchos procedimientos de la purificación que son probables ser realizados.

Ligands

Hay diversas opciones para los ligands que atan a la substancia que las necesidades de ser purificado:

  • Anticuerpos - éstos pueden ser monoclonales o policlonales. La ventaja de ellos es su alta especificidad y constante grande del atascamiento
  • DNA - esto se puede utilizar para las polimerasas, las proteínas DNA-obligatorias, los helicases y las enzimas de la restricción
  • Moléculas aromáticas polysulfanated clorotriazina - éstos se utilizan para las moléculas tales como liasas, hidrolasas, enzimas glycotic, óxidorreductasas
  • Ligands biométricos del tinte - éstos se pueden utilizar para la purificación de la proteína
  • Péptido - éstos se utilizan para las biomoléculas

Las compañías tales como AMSBIO tienen un alcance de diversos materiales a ayudar con cromatografía de afinidad.

Referencias

[Lectura adicional: Cromatografía]

Last Updated: Feb 26, 2019

Deborah Fields

Written by

Deborah Fields

Deborah holds a B.Sc. degree in Chemistry from the University of Birmingham and a Postgraduate Diploma in Journalism qualification from Cardiff University. She enjoys writing about the latest innovations. Previously she has worked as an editor of scientific patent information, an education journalist and in communications for innovative healthcare, pharmaceutical and technology organisations. She also loves books and has run a book group for several years. Her enjoyment of fiction extends to writing her own stories for pleasure.

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