Detección del alergénico usando LC-MS

Los alergénicos se definen como cualquier substancia que pueda causar una reacción alérgica. Los alergénicos pueden ser extremadamente peligrosos, así que el poder descubrirlos en diversas substancias es muy importante. La espectrometría líquida de la cromatografía-masa es un método que ha ganado mucho renombre durante la última década para la detección de alergénicos.

el polen es el alergénico que causa el hayfeverKateryna Kon | Shutterstock

¿Cuáles son alergénicos?

Las alergias son causadas por una inmunorespuesta inadecuada a las substancias de otra manera inofensivas que se conocen como alergénicos. En fin, los individuos hacen extremadamente sensibles a un antígeno determinado, y cuando están expuestos a la substancia, responden con la superproducción del anticuerpo, especialmente inmunoglobulina E.

La detección del alergénico es, por lo tanto, esencial en la industria alimentaria donde los alergénicos se deben contornear en la escritura de la etiqueta. Es también importante en la industria médica, evitar sobre todo que el estado mayor médico administre droga a una persona que sea extremadamente sensible (tales alergias se pueden considerar con la penicilina y muchas otras medicaciones). En ambos casos, la detección de alergénicos puede salvar vidas.

Principios de la espectrometría líquida de la cromatografía-masa

La espectrometría líquida de la cromatografía-masa (LC-MS) se utiliza para analizar muestras complejas de substancias orgánicas e inorgánicas. La cromatografía líquida (LC) implica el separar de mezclas de muestras en componentes más pequeños. Estos componentes más pequeños se pueden entonces analizar usando la espectrometría de masa (MS) para obtener la información con respecto a la estructura de los componentes analizados.

Los datos ganados de LC-MS se pueden trazar sobre un gráfico 3D, donde la índice de la masa-a-carga (ganada del ms) se traza en x-AXIS, el tiempo de retención (ganado del LC) se trazan en y-AXIS, y la intensidad de la señal ganada se traza en z-AXIS.

¿Cuáles son las ventajas de la espectrometría líquida de la cromatografía-masa?

Actualmente, los métodos más penetrantes para descubrir los alergénicos dentro de las comidas y de otras substancias son diversos immunoensayos y reacción en cadena de polimerasa (PCR). El análisis enzima-conectado del inmunosorbente (ELISA) es el immunoensayo más de uso general debido a su simplicidad, rapidez y sensibilidad.

No obstante, los anticuerpos usados durante ELISA pueden cruz-reaccionar con las proteínas de la matriz en vez de reaccionar con las proteínas del alergénico, también algunas proteínas del alergénico deben desnaturalizado calentar, que pueden afectar al atascamiento de anticuerpos a la proteína. Ambas acciones recíprocas pueden llevar a los resultados del falso negativo al analizar ciertos alergénicos, haciendo el análisis menos seguro.

Pues la polimerización en cadena no se puede utilizar para analizar las proteínas, su uso para una mayoría de alergénicos es algo limitado. Sin embargo, los resultados del falso negativo son comunes en caso de que la polimerización en cadena se utilice para analizar los alergénicos que contienen una pequeña parte de DNA (e.g las claras de huevo y leche).

En todo caso, LC-MS es superior a los métodos de ELISA y de la polimerización en cadena, pues puede revisar para los alergénicos múltiples al mismo tiempo. LC-MS es también más exacto que estos métodos, puesto que analiza el peso molecular de las proteínas.

Usando la espectrometría líquida de la cromatografía-masa para descubrir los alergénicos

Durante LC-MS, los alergénicos en una muestra se deben extraer usando un almacenador intermedio de la extracción. El almacenador intermedio de la extracción contiene generalmente la urea y otras substancias químicas, tales como carbonato de hidrógeno del amonio.

Después de la extracción, la mezcla se sacude para extraer las proteínas. La muestra entonces se centrifuga para forzar las proteínas a parte del descanso de la mezcla. Las proteínas cerco posteriormente del sobrenadante, y después se reducen, se alquilizan y se digieren usando las diversas substancias químicas.

La muestra entonces se analiza usando LC-MS. Después del análisis, las estructuras del péptido de alergénicos sabidos se pueden comparar con los datos ganados de la muestra para determinar si los alergénicos están presentes.

LC-MS se ha utilizado para analizar los diversos alergénicos de la comida en muchas diversas matrices de la comida, que permitieron que un patrón internacional fuera fijado.

¿Cuál es el futuro de la espectrometría líquida de la cromatografía-masa?

LC-MS tiene el potencial para incluso la mejoría y el refinamiento adicionales, pues es más seguro, sensible y específico cuando está comparado a ELISA y a la polimerización en cadena. Finalmente, las mejorías a esta técnica ofrecerán más modos eficaces de analizar las proteínas y el socorro del alergénico en reducir los resultados falsos ganados del análisis.

Fuentes

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Last Updated: Mar 14, 2019

Written by

Samuel Mckenzie

Sam graduated from the University of Manchester with a B.Sc. (Hons) in Biomedical Sciences. He has experience in a wide range of life science topics, including; Biochemistry, Molecular Biology, Anatomy and Physiology, Developmental Biology, Cell Biology, Immunology, Neurology  and  Genetics.

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