Techniques de purification d'anticorps

Beaucoup de technologies diagnostiques se fondent sur le dépistage des antigènes par des anticorps. Un exemple de ceci est la technique de biologie moléculaire, ELISA.

Anticorps - par Juan GaertnerCrédit d'image : Juan Gaertner/Shutterstock

Les anticorps utilisés dans des techniques diagnostiques sont souvent produits in vivo, quand un animal est injecté avec de l'antigène spécifique d'une autre substance. Le système immunitaire de l'animal répond en produisant les anticorps, qui peuvent être moissonnés en prélevant un échantillon de sérum.

Cet « antisérum » d'isolement dans l'animal est alors soumis à une opération de purification pour retirer des contaminants, ou pour obtenir juste un type d'anticorps (monoclonal) d'un mélange des anticorps (polyclonaux).

Fractionnement physico-chimique

Le fractionnement physico-chimique décrit les méthodes qui les anticorps indépendants par taille, charge, ou propriétés chimiques. Les différentes classes de l'immunoglobuline (Ig), telles que l'IgM et l'IgG, ont souvent les compositions acides aminées, la solubilité, et la structure assimilées. Le fractionnement physico-chimique exploite ceci, en retirant n'importe quelle molécule qui ne transporte pas les mêmes propriétés.

Chromatographie d'exclusion de taille

Dans cette méthode, les molécules sont triées ont basé sur leur taille et poids moléculaire. Le fléau de chromatographie se compose du dextrane, de l'agarose, ou des talons de polyacrylamide. Basé sur la taille de ces talons, la taille différente des macromolécules peut être isolée.

Les composantes de faible poids moléculaire peuvent être retirées par la dialyse, la déssalement, et la diafiltration. Puis, les résines d'exclusion de taille qui se composent de la coupure de grande molécularité peuvent davantage séparer les immunoglobulines qui sont moins de 140 kDa.

Précipitation de sulfate d'ammonium

Cette méthode est employée pour isoler des anticorps de sérum, de surnageant de culture cellulaire, ou d'ascite liquide. La concentration croissante du sulfate d'ammonium prépare des protéines et d'autres macromolécules de plus en plus insolubles, menant à leur précipitation.

Différentes protéines, y compris des anticorps, précipité aux concentrations spécifiques du sulfate d'ammonium. Par exemple, précipité d'anticorps au sulfate de l'ammonium 40-50%. La pureté des anticorps précipités suivre cette méthode dépend de la température, le pH, le régime auquel salent est ajouté, et temps.

Chromatographie d'échange ionique

La chromatographie d'échange ionique est employée pour isoler ou séparer des composés basés sur leur charge. Le fléau se compose franchement ou négativement - les résines chargées qui grippent alors à négativement ou franchement - les protéines chargées.

Le système de tampon peut être modifié de sorte que l'anticorps d'intérêt soit lié et relâché d'une voie hautement spécifique. Alternativement, le système peut être conçu pour gripper tout autre que l'anticorps d'objectif. Cette méthode est rentable pour purifier des anticorps.

Chromatographie immobilisée de chélate en métal

Dans cette méthode, des ions bivalents immobilisés par chélate en métal sont employés pour gripper les protéines qui contiennent trois résidus ou plus d'histidine.

Les IgG mammifères se composent des boîtiers d'histidine, qui peuvent pour cette raison gripper au nickel immobilisé sur un fléau de chromatographie. Ainsi, cette méthode peut être employée pour épurer et isoler des IgG d'un mélange.

Anticorps d'épuration basés sur leur catégorie

Les anticorps ont evolutionarily économisé des structures. On a développé plusieurs méthodes qui isolent des anticorps basés sur les similitudes de chaque type.

Protéine A, G, et L

La protéine A, G, et L sont les protéines bactériennes et ils ont des domaines spécifiques qui grippent avec des immunoglobulines spécifiques. Chacune des protéines a les propriétés de liage spécifiques ; la protéine A et G grippent à la région de Fc, alors que la protéine L grippage au réseau léger de la région ouvrière.

La protéine A ne grippe pas à IgD et ne grippe pas seulement faible à l'IgA et à l'IgM. La protéine G grippe seulement à l'IgG, alors que la protéine L grippe à toutes les classes d'anticorps. Ainsi, ces protéines bactériennes peuvent être employées pour isoler une classe spécifique d'immunoglobuline. Par exemple, dans un fléau de chromatographie avec la protéine A, le sérum peut être des passages par le fléau et la protéine A peut gripper à et séparer l'IgG du sérum.

Purification d'IgM

Les protéines G et l'A ne grippent pas fortement avec l'IgM car il y a obstacle stérique des régions obligatoires sur l'IgM. Ainsi, à la purification de l'IgM concerne plusieurs méthodes, y compris la précipitation de sulfate d'ammonium, la chromatographie d'échange ionique, la filtration sur gel, et l'électrophorèse de zone.

Purification d'IgA

Cette méthode a été découverte quand un jacalin appelé de lectin de D-galactose a été extrait des graines de jacquier. Ce composé s'est avéré pour contenir quatre domaines identiques, et il grippe à l'IgA. Jacalin peut être immobilisé sur des gels d'agarose et par la suite peut être employé pour épurer et séparer l'IgA d'autres immunoglobulines.

Purification d'IgY

IgY est une seule immunoglobuline effectuée par des poulets, et il est présent en quantité élevée en jaune d'oeuf. Les protéines A, G, et L ne peuvent pas être employées pour épurer IgY car ces protéines ne grippent pas à IgY. Ainsi, la méthode de précipitation de sulfate d'ammonium est employée pour épurer IgY.   

purification d'affinité d'Antigène-détail des anticorps

Pendant que les anticorps grippent à un antigène spécifique, cette interaction peut également être employée pour purifier des anticorps. La purification d'affinité concerne immobiliser un antigène qui est spécifique pour un anticorps, tel que seulement les anticorps qui grippent à l'antigène spécifique sont isolés. Cette méthode est méthode appelée d'immobilisation de ligand pour la purification d'affinité.

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Last Updated: Oct 22, 2018

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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