Técnicas da purificação do anticorpo

Muitas tecnologias diagnósticas confiam na detecção de antígenos por anticorpos. Um exemplo deste é a técnica da biologia molecular, ELISA.

Anticorpos - por Juan GaertnerCrédito de imagem: Juan Gaertner/Shutterstock

Os anticorpos usados em técnicas diagnósticas estão gerados frequentemente in vivo, quando um animal é injectado com um antígeno específico de uma outra espécie. O sistema imunitário do animal responde produzindo os anticorpos, que podem ser colhidos tomando uma amostra do soro.

Este “anti-soro” isolado do animal é sujeitado então a uma etapa da purificação para remover os contaminadores, ou para obter apenas um tipo de anticorpo (monoclonal) de uma mistura dos anticorpos (polyclonal).

Fraccionamento físico-químico

O fraccionamento físico-químico descreve os métodos que anticorpos separados pelo tamanho, pela carga, ou por propriedades químicas. As classes diferentes de imunoglobulina (Ig), tais como IgM e IgG, têm frequentemente composições de ácido aminado, a solubilidade, e a estrutura similares. O fraccionamento físico-químico explora este, removendo toda a molécula que não levar as mesmas propriedades.

Cromatografia da exclusão do tamanho

Neste método, as moléculas são classificadas basearam em seus tamanho e peso molecular. A coluna de cromatografia consiste no dextrano, no agarose, ou nos grânulos do polyacrylamide. Baseado no tamanho destes grânulos, o tamanho diferente das macromoléculas pode ser isolado.

O ponto baixo - os componentes do peso molecular podem ser removidos pela diálise, pela dessalinização, e pelo diafiltration. Então, as resinas da exclusão do tamanho que consistem na elevação - interrupção molecular podem mais separar as imunoglobulina que são menos do kDa 140.

Precipitação do sulfato do amónio

Este método é usado para isolar anticorpos do soro, do supernatant da cultura celular, ou das ascites fluidas. A concentração crescente de sulfato do amónio faz as proteínas e as outras macromoléculas cada vez mais insolúveis, conduzindo a sua precipitação.

As proteínas diferentes, incluindo anticorpos, precipitam em concentrações específicas de sulfato do amónio. Por exemplo, anticorpos precipitados no sulfato do amónio 40-50%. A pureza dos anticorpos precipitados usando este método depende da temperatura, o pH, a taxa em que salga é adicionada, e tempo.

Cromatografia da troca iónica

A cromatografia da troca iónica é usada para isolar ou separar os compostos baseados em sua carga. A coluna consiste positivamente ou negativamente - as resinas cobradas que ligam então a negativamente ou positivamente - proteínas cobradas.

O sistema do amortecedor pode ser alterado de modo que o anticorpo do interesse seja limitado e liberado em uma maneira altamente específica. Alternativamente, o sistema pode ser projectado ligar tudo a não ser o anticorpo do alvo. Este método é eficaz na redução de custos refinar anticorpos.

Cromatografia imobilizada do quelato do metal

Neste método, os íons divalent imobilizados quelato do metal são usados para ligar as proteínas que contêm três ou mais resíduos do histidine.

IgGs mamífero consiste nos conjuntos do histidine, que podem conseqüentemente ligar ao níquel imobilizado em uma coluna de cromatografia. Assim, este método pode ser usado para refinar e isolar IgGs de uma mistura.

Refinando os anticorpos baseados em sua classificação

Os anticorpos conservaram evolutionarily estruturas. Diversos métodos foram desenvolvidos que isolam os anticorpos baseados nas similaridades de cada classe.

Proteína A, G, e L

A proteína A, G, e L é proteínas bacterianas e têm os domínios específicos que ligam com imunoglobulina específicas. Cada um das proteínas tem propriedades obrigatórias específicas; a proteína A e G ligar à região de Fc, quando a proteína L ligamento à corrente clara da região fabuloso.

A proteína A não liga a IgD e somente não liga fraca a IgA e a IgM. A proteína G liga somente a IgG, quando a proteína L ligar a todas as classes do anticorpo. Assim, estas proteínas bacterianas podem ser usadas para isolar uma classe específica de imunoglobulina. Por exemplo, em uma coluna de cromatografia com proteína A, o soro pode ser passagens através da coluna e a proteína A pode ligar a e separar IgG do soro.

Purificação de IgM

As proteínas G e A não ligam fortemente com IgM porque há um obstáculo steric das regiões obrigatórias em IgM. Assim, à purificação de IgM envolve diversos métodos, incluindo a precipitação do sulfato do amónio, a cromatografia da troca iónica, a filtragem de gel, e a electroforese da zona.

Purificação de IgA

Este método foi descoberto quando um lectin da D-galactose chamado jacalin foi extraído das sementes do jackfruit. Este composto foi encontrado para conter quatro domínios idênticos, e liga a IgA. Jacalin pode ser imobilizado em geles do agarose e subseqüentemente pode ser usado para refinar e separar IgA de outras imunoglobulina.

Purificação de IgY

IgY é uma imunoglobulina original feita por galinhas, e esta presente em quantidades altas na gema. As proteínas A, G, e L não podem ser usadas para refinar IgY porque estas proteínas não ligam a IgY. Assim, o método da precipitação do sulfato do amónio é usado para refinar IgY.   

purificação Antígeno-específica da afinidade dos anticorpos

Enquanto os anticorpos ligam a um antígeno específico, esta interacção pode igualmente ser usada para refinar anticorpos. A purificação da afinidade envolve imobilizar um antígeno que seja específico para um anticorpo, tal que somente os anticorpos que ligam ao antígeno específico são isolados. Este método é chamado método da imobilização da ligante para a purificação da afinidade.

Fontes

Further Reading

Last Updated: Oct 22, 2018

Dr. Surat P

Written by

Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    P, Surat. (2018, October 22). Técnicas da purificação do anticorpo. News-Medical. Retrieved on February 18, 2020 from https://www.news-medical.net/life-sciences/Antibody-Purification-Techniques.aspx.

  • MLA

    P, Surat. "Técnicas da purificação do anticorpo". News-Medical. 18 February 2020. <https://www.news-medical.net/life-sciences/Antibody-Purification-Techniques.aspx>.

  • Chicago

    P, Surat. "Técnicas da purificação do anticorpo". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/Antibody-Purification-Techniques.aspx. (accessed February 18, 2020).

  • Harvard

    P, Surat. 2018. Técnicas da purificação do anticorpo. News-Medical, viewed 18 February 2020, https://www.news-medical.net/life-sciences/Antibody-Purification-Techniques.aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News-Medical.Net.