Técnicas de la purificación del anticuerpo

Muchas tecnologías diagnósticas confían en la detección de antígenos por los anticuerpos. Un ejemplo de esto es la técnica de la biología molecular, ELISA.

Anticuerpos - por Juan GaertnerHaber de imagen: Juan Gaertner/Shutterstock

Los anticuerpos usados en técnicas diagnósticas se generan a menudo in vivo, cuando un animal se inyecta con un antígeno específico de otra especie. El sistema inmune del animal responde produciendo los anticuerpos, que pueden ser cosechados recogiendo una muestra del suero.

Este “antisuero” aislado del animal entonces se sujeta a un paso de la purificación para quitar los contaminantes, o para obtener apenas un tipo de anticuerpo (monoclonal) de una mezcla de los anticuerpos (policlonales).

Fraccionamiento fisicoquímico

El fraccionamiento fisicoquímico describe los métodos que los anticuerpos separados por talla, la carga, o las propiedades químicas. Las diversas clases de la inmunoglobulina (Ig), tales como IgM e IgG, tienen a menudo composiciones de aminoácido, solubilidad, y estructura similares. El fraccionamiento fisicoquímico explota esto, quitando cualquier molécula que no lleve las mismas propiedades.

Cromatografía de la exclusión de la talla

En este método, las moléculas clasificación basaron en su talla y peso molecular. La olumna de cromatografía consiste en el dextrano, la agarosa, o molduras de la poliacrilamida. De acuerdo con la talla de estas molduras, diversa talla de macromoléculas puede ser aislada.

Los componentes de poco peso molecular se pueden quitar por la diálisis, la desalación, y la diafiltración. Entonces, las resinas de la exclusión de la talla que consisten en atajo de molecularidad elevada pueden separar más lejos las inmunoglobulinas que son menos del kDa 140.

Precipitación del sulfato del amonio

Este método se utiliza para aislar los anticuerpos del suero, del sobrenadante del cultivo celular, o de las ascitis flúidas. La concentración cada vez mayor de sulfato del amonio hace las proteínas y otras macromoléculas cada vez más insolubles, llevando a su precipitación.

Diversas proteínas, incluyendo los anticuerpos, precipitado en las concentraciones específicas de sulfato del amonio. Por ejemplo, precipitado de los anticuerpos en el sulfato del amonio 40-50%. La pureza de los anticuerpos precipitados usando este método depende de la temperatura, el pH, el régimen en el cual sala se agrega, y tiempo.

Cromatografía de intercambio iónico

La cromatografía de intercambio iónico se utiliza para aislar o para separar las composiciones basadas en su carga. La olumna consiste en positivo o negativo - las resinas cargadas que entonces atan a negativo o positivo - las proteínas cargadas.

El sistema del almacenador intermedio puede ser modificado para limitar y esté liberado el anticuerpo del interés de una manera altamente específica. Alternativamente, el sistema se puede diseñar para atar todo con excepción del anticuerpo del objetivo. Este método es de poco costo purificar los anticuerpos.

Cromatografía inmovilizada del quelato del metal

En este método, los iones bivalentes inmovilizados quelato del metal se utilizan para atar las proteínas que contienen tres o más residuos de la histidina.

IgGs mamífero consiste en los atados de la histidina, que pueden por lo tanto atar al níquel inmovilizado en una olumna de cromatografía. Así, este método se puede utilizar para purificar y para aislar IgGs de una mezcla.

Anticuerpos de la purificación basados en su clasificación

Los anticuerpos evolutionarily han conservado las estructuras. Se han desarrollado varios métodos que aíslan los anticuerpos basados en las semejanzas de cada clase.

Proteína A, G, y L

La proteína A, G, y L es proteínas bacterianas y tienen dominios específicos que aten con las inmunoglobulinas específicas. Cada uno de las proteínas tiene propiedades obligatorias específicas; la proteína A y G ata a la región de Fc, mientras que la proteína L lazo a la cadena liviana de la región fabulosa.

La proteína A no ata a IgD y no ata solamente débil a IgA y a IgM. La proteína G ata solamente a IgG, mientras que la proteína L ata a todas las clases del anticuerpo. Así, estas proteínas bacterianas se pueden utilizar para aislar una clase específica de la inmunoglobulina. Por ejemplo, en una olumna de cromatografía con la proteína A, el suero puede ser pases a través de la olumna y la proteína A puede atar a y separar IgG del suero.

Purificación de IgM

Las proteínas G y A no atan fuertemente con IgM pues hay obstáculo estérico de las regiones obligatorias en IgM. Así, a la purificación de IgM implica varios métodos, incluyendo la precipitación del sulfato del amonio, la cromatografía de intercambio iónico, la filtración de gel, y la electroforesis de la zona.

Purificación de IgA

Este método fue destapado cuando un lectin de la D-galactosa llamado jacalin fue extraído de las semillas del jackfruit. Esta composición fue encontrada para contener cuatro dominios idénticos, y ata a IgA. Jacalin se puede inmovilizar en los geles de la agarosa y se puede utilizar posteriormente para purificar y para separar IgA de otras inmunoglobulinas.

Purificación de IgY

IgY es una inmunoglobulina única hecha por los pollos, y está presente en altas cantidades en yema de huevo. Las proteínas A, G, y L no se pueden utilizar para purificar IgY pues estas proteínas no atan a IgY. Así, el método de la precipitación del sulfato del amonio se utiliza para purificar IgY.   

purificación Antígeno-específica de la afinidad de anticuerpos

Mientras que los anticuerpos atan a un antígeno específico, esta acción recíproca se puede también utilizar para purificar los anticuerpos. La purificación de la afinidad implica el inmovilizar de un antígeno que sea específico para un anticuerpo, tal que solamente los anticuerpos que atan al antígeno específico se aíslan. Este método se llama método de la inmovilización del ligand para la purificación de la afinidad.

Fuentes

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Last Updated: Oct 22, 2018

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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