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Applications de CLARTÉ

La CLARTÉ ou le Tissu-hydrogel situ-hybridation-compatible rigide de la représentation d'Acrylamidehybridized Lipide-mélangé par espace libre/Immunostaining/In est une méthode de fixation histologique et de disculpation.

La CLARTÉ est employée pour exécuter l'immunohistochimie pendant qu'elle met à jour des fluorophores tandis que représentation et exécuter la reconstruction 3D pour de grands volumes. Cette méthode est basée sur produire un hydrogel qui élimine les lipides et maintient les protéines et l'ADN du tissu intacts.

La CLARTÉ est une méthode populaire dMichael Braham | Shutterstock

Mécanisme de CLARTÉ

La CLARTÉ concerne produire un hybride de tissu-hydrogel en polymérisant les protéines avec l'ADN et l'ARN utilisant l'acrylamide. Ceci est basé sur la capacité de l'acrylamide de gripper les molécules qui ont des extrémités d'amine, y compris des protéines, ADN, et l'ARN. Ceci produit une structure squelettique que de plus grandes protéines peuvent encore imprégner.

Le détergent est alors ajouté pour encapsuler des lipides dans les micelles qui sont alors transportées par les pores de la structure squelettique utilisant un champ électrique appliqué. Les anticorps à employer dans un immunoessai sont par la suite ajoutés et ils peuvent également réussir par les pores et gripper aux protéines de membrane.

La procédure par étages pour la création de CLARTÉ est : fixant le tissu, formant des hydrogels, extrayant les lipides, et apparier l'indice de réfraction.

Échantillons d'être humain de représentation

Une application efficace de CLARTÉ se situe dans sa capacité de permettre la représentation claire de l'esprit humain pendant la pathogénie ou la condition malade. Les cas qui ont été conçus utilisant la CLARTÉ comprennent Alzheimer, Parkinson, neurodegeneration pendant la Maladie mitochondriale, l'autisme, et l'épilepsie insurmontable. Ceux-ci ont été conçus en tissus qui étaient fixes utilisant la formaline.

Des échantillons de cerveau qui ont été fixés en paraformaldéhyde et soumis à la cryopréservation en sucrose ont été également examinés utilisant la CLARTÉ. Dans ces cas, la myélinisation et la durée de la fixation en formaline détermine souvent la vitesse avec laquelle le jeu de tissu est obtenu. Cependant, dans certains cas, on a observé le tissu pour augmenter transitoirement quand les tissus ont été exposés aux méthodes de disculpation de tissu pendant des durées étendues, telles que plus grand que 40 jours.

Représentation le système nerveux et le réseau vasculaire

Les études prouvent que le muscle squelettique peut être libéré utilisant la technique de la CLARTÉ ; cependant, il est plus difficile de libérer les jonctions neuromusculaires. C'est parce que l'édition absolue et la fixation considérables à ces jonctions évitent souvent l'accès des sondes marquées aux récepteurs d'acétylcholine.

Il a cependant été possible de viser les nerfs périphériques utilisant l'immunohistochimie ou les traceurs liphophiles. Les cellules endothéliales peuvent également être imagées par demande de règlement avec une Dilué-teinture ou biocytin avant la réparation.

Muscle et os de représentation

Les tendons sont riches en collagène les rendant opaques et difficiles à libérer. Ceci peut être amélioré en augmentant le temps de disculpation pendant la CLARTÉ et en réglant également l'indice de réfraction. Des chondrocytes ou les cellules qui effectuent le cartilage peuvent être souillés utilisant la teinture liphophile, telle que Dilué-SP.

Le tissu osseux a le teneur inférieur de lipide, la teneur en minéraux complémentaire, et la moelle osseuse. Ces tissus peuvent être libérés suivre des méthodes solvant solvant ou en ajoutant une opération de décalcification. Dans cette opération, le tissu est maintenu par intermittence dans l'EDTA et le SDS au pH accru.

Cette modification produit d'une profondeur de visualisation de 200-300µm. L'opération d'enlèvement de calcium peut fournir une profondeur complémentaire de visualisation de 1,5 millimètres. La moelle osseuse est également riche en protéine de heme qui produit de l'autofluorescence. Ceci est réglé en retirant la partie de heme utilisant aminoalcool avant le procédé d'apparier réfringent.

Représentation les autres organes et substance

La CLARTÉ a été employée à l'image plusieurs organes, tels que le foie, le rein, le pancréas, les glandes surrénales, la rate, le tissu lymphoïde, l'intestin, les testicules, les ovaires, le tissu de poumon, etc. Cependant, le protocole doit être modifié a basé sur le type de tissu car les différents tissus ont différentes densités, rapports de protéines et de lipides, périodes libérantes, et l'indice de réfraction moyen de l'hydrogel.

Cette méthode a été également exécutée sur d'autres organismes, tels que des lapins, des poulets, des zebrafish, le Xenopus, le poulpe, et d'autres. Dans le cas des centrales, une opération complémentaire de dégradation est ajoutée pour enlever la disculpation de tissu de goujon de paroi cellulaire. Ceci est fait pour libérer et souiller les cellules sans recourir au sectionnement du tissu.

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Last Updated: Apr 5, 2019

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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