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Applicazioni di CHIAREZZA

La CHIAREZZA o l'Tessuto-idrogel situ-ibridazione-compatibile rigido della rappresentazione/Immunostaining/In di Acrylamidehybridized Lipido-scambiato radura è un metodo di fissazione e di schiarimento istologici.

La CHIAREZZA è usata per eseguire il immunohistochemistry mentre mantiene i fluorophores mentre la rappresentazione ed eseguire la ricostruzione 3D per i grandi volumi. Questo metodo è basato sulla creazione dell'idrogel che elimina i lipidi e tiene le proteine ed il DNA del tessuto intatti.

La CHIAREZZA è un metodo popolare di eliminare i lipidi dal tessuto cerebrale per vedere altre strutture quali i neuroniMichael Braham | Shutterstock

Meccanismo di CHIAREZZA

La CHIAREZZA comprende creare un ibrido dell'tessuto-idrogel polimerizzando le proteine con il DNA ed il RNA facendo uso dell'acrilamide. Ciò è basata sulla capacità dell'acrilamide di legare le molecole che hanno estremità dell'ammina, compreso le proteine, DNA ed il RNA. Ciò crea una struttura scheletrica che le più grandi proteine possono ancora pervadere.

Il detersivo poi si aggiunge per incapsulare i lipidi nelle micelle che poi sono portate attraverso i pori della struttura scheletrica facendo uso di un campo elettrico applicato. Gli anticorpi da utilizzare in un immunoassay successivamente si aggiungono e possono anche passare attraverso i pori e legare alle proteine della membrana.

La procedura passo-passo per la creazione di CHIAREZZA è: fissando il tessuto, formando gli idrogel, estraendo i lipidi ed accoppiamento dell'indice di rifrazione.

Campioni dell'essere umano di rappresentazione

L'un'applicazione potente di CHIAREZZA si trova nella sua capacità di permettere la chiara rappresentazione del cervello umano durante la patogenesi o lo stato malato. I casi che sono stati visualizzati facendo uso di CHIAREZZA includono Alzheimer, Parkinson, neurodegeneration durante la malattia mitocondriale, l'autismo e l'epilessia intrattabile. Questi sono stati visualizzati in tessuti che erano fissi facendo uso di formalina.

I campioni del cervello che sono stati fissati in paraformaldeide e sono stati sottoposti al cryopreservation in saccarosio egualmente sono stati esaminati facendo uso di CHIAREZZA. In questi casi, il myelination e la durata della fissazione in formalina determina spesso la velocità con cui lo spazio del tessuto è ottenuto. Tuttavia, in alcuni casi, il tessuto è stato osservato per espandersi transitoriamente quando i tessuti sono stati esposti ai metodi di schiarimento del tessuto per le durate estese, quali i più maggior di 40 giorni.

Rappresentazione il sistema nervoso ed il sistema vascolare

Gli studi indicano che il muscolo scheletrico può essere rimosso facendo uso della tecnica di CHIAREZZA; tuttavia, è più difficile da rimuovere le giunzioni neuromuscolari. Ciò è perché l'estesi inter-collegamento e fissazione a queste giunzioni impediscono spesso l'accesso delle sonde contrassegnate ai ricevitori dell'acetilcolina.

, Tuttavia, è stato possibile mirare ai nervi periferici facendo uso del immunohistochemistry o degli elementi traccianti lipofilici. Le celle endoteliali possono anche essere imaged dal trattamento con una Diluito-tintura o dal biocytin prima del fissatore.

Muscolo ed osso di rappresentazione

I tendini sono ricchi in collageno che li rende opachi e difficili annullare. Ciò può essere migliorata aumentando il tempo di schiarimento durante la CHIAREZZA ed anche regolando l'indice di rifrazione. Chondrocytes o le celle che fanno la cartilagine può essere macchiata facendo uso della tintura lipofilica, quale Diluito-SP.

Il tessuto dell'osso ha il contenuto basso del lipido, il tenore di minerale supplementare e midollo osseo. Questi tessuti possono essere rimossi facendo uso ai dei metodi basati a solvente o aggiungendo un punto della decalcificazione. A questo punto, il tessuto è tenuto intermittentemente in ED e nello SDS a pH aumentato.

Questa modifica genera una profondità di visualizzazione di 200-300µm. Il punto di rimozione del calcio può fornire una profondità supplementare di visualizzazione di 1,5 millimetri. Il midollo osseo è egualmente ricco in proteina del heme che genera il autofluorescence. Ciò è regolato eliminando la parte del heme facendo uso dell'alcool amminico prima del trattamento della corrispondenza rifrangente.

Rappresentazione altri organi e specie

La CHIAREZZA è stata usata all'immagine parecchi organi, quali il fegato, il rene, il pancreas, le ghiandole surrenali, la milza, il tessuto linfoide, l'intestino, i testicoli, le ovaie, il tessuto polmonare, ecc. Tuttavia, il protocollo deve essere modificato ha basato sul tipo del tessuto poichè i tessuti differenti hanno le densità differenti, i rapporti delle proteine e dei lipidi, i periodi annullanti e l'indice di rifrazione medio dell'idrogel.

Questo metodo egualmente è stato eseguito su altri organismi, come i conigli, i polli, gli zebrafish, il Xenopus, il polipo ed altri. Nel caso degli impianti, un punto supplementare di degradazione si aggiunge per eliminare lo schiarimento del tessuto del paletto della parete cellulare. Ciò è fatta per rimuovere e macchiare le celle senza ricorrere alla divisione del tessuto.

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Last Updated: Apr 5, 2019

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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