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Técnicas da revelação do ensaio

Os ensaios são sistemas de teste científicos desenvolvidos com a finalidade de avaliar os efeitos de compostos químicos em processos biológicos do alvo. Estes podem ser celulares, moleculars ou bioquímicos, com o objectivo de promover o teste da revelação e da toxicidade da droga.

poço 96 tarde com as amostras para o ensaio - pela foto do laboratório

Foto do laboratório | Shutterstock

Objetivos da revelação do ensaio

Os ensaios precisam de ser específicos para sua finalidade da pesquisa, sejam aquele que determina níveis celulares de proteínas específicas, identificação de moléculas novas potenciais da droga, ou medidas quantitativas dos níveis de expressão genética. Os ensaios de uso geral incluem o ensaio enzima-ligado da imunoabsorção (ELISA) para detectar e determinar peptides, proteínas, anticorpos, e hormonas.

Quase cada empresa centra-se sobre os ensaios tornando-se baseados no feedback da comunidade de pesquisa. A primeira etapa tende a ser a selecção pequena da molécula da alto-produção, que mostra as pontas de prova apropriadas para explorar processos biológicos ou candidatos na revelação da droga. Os ensaios podem usar uma variedade de sistemas de detecção, tais como a absorvência, a fluorescência, a radioactividade ou a espectrometria em massa.

Que são aspectos fulcrais da revelação do ensaio?

Ao desenvolver um ensaio, é importante manter na mente os trabalhos inteiros da preparação da amostra à análise da qualidade dos dados, não apenas o ensaio próprio. Tais considerações incluem a escolha da molécula para analisar, do parâmetro a analisar, da fonte da molécula, e dos específicos do ensaio próprios.

Os ensaios diferentes exigem considerações diferentes. Por exemplo, deve ser deliberado antes da revelação se o ensaio deve visar a quantidade de uma molécula específica que este presente, da função ou dos níveis biológicos da expressão genética. Alguns estudos podem exigir todos os três ensaios ser desenvolvido, porque todas estas técnicas do ensaio forneceriam a informação diferente (mas todavia elogiosa).

A fonte das moléculas do interesse é da importância particular à preparação da amostra. Por exemplo, a molécula pode ser obtenível no líquido de corpo, um animal experimental, ou das pilhas cultivadas in vitro. Independentemente da preparação da amostra, a fonte dita a quantidade e a disponibilidade da amostra. A fonte pode conseqüentemente ter diversos efeitos a jusante ao desenvolver vários ensaios.

Uma vez que a molécula do interesse foi seleccionada e sua fonte estêve considerada, o parâmetro do ensaio do interesse precisa de ser escolhido com cuidado. Os parâmetros incluir tais como a especificidade, a sensibilidade, o vigor, a reprodutibilidade e a análise do ensaio.

Entre aqueles, a especificidade é da importância chave ao ensaio. Determinados tipos de ensaios (por exemplo ensaios baseados HPLC) produzem picos em tempos de retenção diferentes. Os pesquisadores precisam de poder decidir se o pico pertence à molécula do interesse, ou uma molécula diferente que co-elutes com a molécula do interesse.

Similarmente, a especificidade pode ser afetada se outras enzimas na amostra podem afectar os pesquisadores do evento desejam estudar, como um evento da fosforilação. Isto pode geralmente ser resolvido incluindo uma etapa adicional na preparação da amostra, mas outros factores devem ser considerados também.

Técnicas do ensaio e da selecção

A selecção quantitativa da alto-produção (qHTS) é um processo em que cada composto dentro de uma grande biblioteca química é testado em diversas concentrações. O aspecto quantitativo permite que integre o relacionamento dependente da dose com a velocidade e a precisão da selecção convencional da alto-produção.

A selecção da combinação da matriz é um outro método da alto-produção para testar quantidades vastas de pares da droga-droga para actividades sinérgicos, aditivas, e/ou antagónicas. Este método de selecção é em particular conveniente para explorar combinações terapêuticas potenciais.

Os esforços da descoberta da droga empregam tipicamente os ensaios da alto-produção, que por sua vez usam frequentemente sistemas de detecção fluorescentes e luminescentes. Tais sistemas podem ser automatizado em grande parte, e podem então realizar um grande número ensaios.

os ensaios celulares Etiqueta-livres estão crescendo na popularidade e estão tornando-se muito mais fáceis de tornar-se. Tais ensaios utilizam métodos de detecção biofísicos para evitar a possibilidade de criar produtos manufacturados pela presença do sistema de detecção.

Um exemplo deste é uma molécula bioluminescent de uso geral da detecção chamada o luciferin do vaga-lume do `', que é um agonista parcial de GPR35 e pode assim complicar a interpretação de dados farmacológicos. Isto serve como um lembrete para considerar interacções compostas ao projetar técnicas do ensaio.

Fontes

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Last Updated: Nov 20, 2018

Sara Ryding

Written by

Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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