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Ensaio para monitorar e tratar tumores cerebrais malignos

Os pesquisadores no centro médico Hamburgo-Eppendorf da universidade desenvolveram um ensaio robusto que poderia servir como uma ferramenta diagnóstica para monitorar o estado da doença, a resposta do tratamento e a progressão do tumor nos pacientes com glioma.

O método usa o cytometry de fluxo da imagem lactente (IFCM) para caracterizar e isolar populações extracelulares tumor-específicas da vesícula nesta população paciente.

Faixa clara a:

ensaioCréditos de imagem: Maltsev Semion/Shutterstock.com

Detectando as mudanças que indicam a resposta do tratamento é desafiante

Um obstáculo clínico significativo na gestão do cancro é a detecção de mudanças moleculars e celulares nos tumores durante o tratamento que indicará resposta ou resistência dos pacientes' à terapia.

Quando as tecnologias cada vez mais sensíveis e específicas emergirem, são caras e frequentemente nao apropriado para o uso sobre freqüente, tempo seqüencial do curto-intervalo aponta. Os pesquisadores tornaram-se conseqüentemente interessados nos materiais biológicos liberados pelos tumores que podem ser obtidos pela biópsia líquida e poderiam servir como biomarkers para a progressão do cancro.

Com exceção das pilhas de circulação do tumor e do ADN de circulação do tumor, que são os analytes os mais comuns usaram-se em ensaios líquidos da biópsia, as vesículas extracelulares (EVs) receberam o interesse crescente ao longo dos últimos anos.

As pilhas liberam as vesículas nano-feitas sob medida como exosomes ou com da brotamento da membrana de plasma como EVs. Este EVs é conhecido para jogar papéis importantes na doença e poderia servir como biomarkers nas pacientes que sofre de cancro, incluindo em pacientes da glioma.

A maioria de células cancerosas derramam EVs no microambiente do tumor que contem a carga molecular tal como proteínas, ácidos nucleicos, e lipidos. O índice de EV reflecte a pilha da origem, significar EVs pode servir como uma fonte de genetically ou o material biologicamente activo.

Contudo, as tecnologias actuais não são ainda específico bastante para caracterizar indivíduos EVs. Os estudos precedentes que analisam EVs que circula no sangue e no plasma usaram geralmente a mancha ocidental, o cytometry de fluxo grânulo-baseado ou a análise de seguimento do nanoparticle (NTA) às preparações maiorias dos burros EV.

Desde que EVs é derramado igualmente por pilhas normais, tais preparações “são contaminadas invariàvel” por EVs derivado não-tumor. Isto conduz à baixa sensibilidade da detecção de alterações moleculars tumor-específicas por métodos tais como arranjar em seqüência do ADN e do RNA ou espectrometria em massa e não é apropriado para a detecção de mutações raras, monitoração do tratamento ou para a análise precisa de único EVs.

Tal análise exigiria umas técnicas mais sofisticadas que permitissem a identificação e o enriquecimento de EVs tumor-específico de reduzir os sinais derivados das pilhas saudáveis.

Usando IFCM para a única análise de EV

IFCM tem sido usado previamente para seguir a EV-tomada celular e para monitorar capacidade das partículas' para ligar à membrana de pilha exterior. Contudo, devido a seu tamanho minúsculo (tipicamente <1000 nanômetro) destes nanoparticles, a análise de superfície da proteína de único EVs apresenta um desafio significativo.

EVs é identificado geralmente por membros da família CD9, CD63, e CD81 do tetraspanin, que são altamente abundantes na superfície de EV. Contudo, poucos estudos olharam a heterogeneidade entre subpopulações tetraspanin-positivas diferentes de EV.

Agora, Katrin Lamszus e os colegas demonstraram IFCM para ser uma técnica robusta, multiparametric para a única análise do CD9, CD63 de EV, perfis CD81 de superfície para a discriminação de subpopulações distintas da glioma EV.

EVs foi manchado usando um protocolo robusto da imunofluorescência, e a filtragem de membrana simultânea foi usada para eliminar anticorpos excessivos desatados antes da análise de IFCM.

A conformidade de anticorpos fluoróforo-conjugados disponíveis no comércio para a única detecção de EV foi validada pela luz e pela microscopia de elétron correlativas. A análise do multiparâmetro IFCM foi aperfeiçoada com a integração de ajustes distintos do software para única-EV a caracterização robusta, prática e simples.

Perfis do tetraspanin do teste EV em linha celular do cancro e em pacientes da glioma

Como relatado no jornal das vesículas extracelulares, CD9, CD63, e CD81 fluorescente-etiquetaram único EVs manchado anticorpos em uma forma de superfície multiparametric da proteína e permitiram a detecção de EVs triplo-positivo assim como escolhem EVs positivo.

Após ter estabelecido que IFCM pode detectar tetraspanins diferentes em único EVs, a equipe analisou os perfis da expressão do tetraspanin de EV em linha celular do cancro e em pilhas humanas do não-tumor, assim como nas pilhas elas mesmas.

Após ter encontrado que as linha celular do glioblastoma segregam EVs com perfis diferentes do tetraspanin comparou com as pilhas normais, a equipe decidida testar se os perfis do tetraspanin estão alterados igualmente em circular EVs dos pacientes do glioblastoma.

De “a análise IFCM de EVs que expressa CD9, CD63 ou CD81 isolada do plasma paciente revelou níveis significativamente aumentados de CD63+ EVs nos pacientes com o glioblastoma comparado com os doadores saudáveis,” relata a equipe. Uma tendência similar mas nao significativa foi observada para CD81.

Os números totais de CD63+/CD81+ e de CD9+/CD63+ dobro-positivos EVs foram aumentados em pacientes do glioblastoma e a proporção de todas as três fracções dobro-positivas diferentes de EV era elevado, com a combinação de CD63+/CD81+ que é a mais significativa.

Os autores dizem que o estudo fornece o prova--princípio para a possibilidade de usar IFCM para identificar as subpopulações distintas de EV que circulam no sangue de pacientes da glioma.

“Actualmente, os pacientes da glioma são seguidos por varreduras periódicas de MRI, e a detecção de lesões suspeitos exige a biópsia invasora ou resseção do tumor para a confirmação diagnóstica,” escrevem.

EVs, por outro lado, que pode facilmente ser obtido pela biópsia líquida, “poderia transformar-se uma alternativa não invasora para fornecer a informação dinâmica no estado do tumor e seu perfil molecular,” conclui Lamszus e equipe.

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Last Updated: Nov 6, 2019

Sally Robertson

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Sally Robertson

Sally has a Bachelor's Degree in Biomedical Sciences (B.Sc.). She is a specialist in reviewing and summarising the latest findings across all areas of medicine covered in major, high-impact, world-leading international medical journals, international press conferences and bulletins from governmental agencies and regulatory bodies. At News-Medical, Sally generates daily news features, life science articles and interview coverage.

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