Análisis para vigilar y tratar tumores cerebrales malos

Un obstáculo clínico importante en la administración del cáncer es la detección de cambios moleculares y celulares en tumores durante el tratamiento que indicará reacción o resistencia a los pacientes' a la terapia.

Mientras que están emergiendo las tecnologías cada vez más sensibles y específicas, son costosas y a menudo no conveniente para el uso sobre frecuente, tiempo secuencial del corto-intervalo apunta. Los investigadores por lo tanto han hecho interesados en los materiales biológicos liberados por los tumores que se pueden obtener por biopsia líquida y podrían servir como biomarkers para la progresión del cáncer.

Independientemente de las células de circulación del tumor y de la DNA de circulación del tumor, que son los analitos mas comunes utilizaron en análisis líquidos de la biopsia, las vesículas extracelulares (EVs) han recibido interés cada vez mayor en los últimos años.

Las células liberan las vesículas nano-clasificadas como exosomes o con el florecimiento de la membrana de plasma como EVs. Este EVs se conoce para desempeñar papeles importantes en enfermedad y podría servir como biomarkers en los enfermos de cáncer, incluyendo en pacientes de la glioma.

La mayoría de las células cancerosas vierten EVs en el microambiente del tumor que contiene el cargamento molecular tal como proteínas, ácidos nucléicos, y lípidos. El contenido de EV refleja la célula del origen, significar EVs puede servir como una fuente de genético o material biológicamente activo.

Sin embargo, las tecnologías actuales no son todavía específico bastante para caracterizar los individuos EVs. Los estudios anteriores que analizaban EVs que circulaba en sangre y plasma han utilizado generalmente borrar occidental, cytometry de flujo moldura-basado o análisis de búsqueda del nanoparticle (NTA) a las preparaciones a granel de los asnos EV.

Puesto que EVs también es vertido por las células normales, tales preparaciones “son contaminadas invariable” por EVs derivado no-tumor. Esto da lugar a la sensibilidad inferior de la detección de cambios moleculares tumor-específicos por métodos tales como DNA y secuencia o espectrometría de masa del ARN y no es conveniente para la detección de mutaciones raras, supervisión del tratamiento o para el análisis exacto de único EVs.

Tal análisis requeriría técnicas más sofisticadas que permiten a la identificación y al enriquecimiento de EVs tumor-específico reducir las señales derivadas de las células sanas.

IFCM se ha utilizado previamente para rastrear la EV-absorción celular y para vigilar capacidad de las partículas' de atar a la membrana celular exterior. Sin embargo, debido a su talla minúscula (típicamente <1000 nanómetro) de estos nanoparticles, el análisis superficial de la proteína de único EVs presenta un reto importante.

EVs es determinado común por las piezas de la familia CD9, CD63, y CD81 del tetraspanin, que son altamente abundantes en la superficie de EV. Sin embargo, pocos estudios han observado la heterogeneidad entre diversas subpoblaciones tetraspanin-positivas de EV.

Ahora, Catalina Lamszus y los colegas han demostrado IFCM para ser una técnica robusta, multiparametric para el único análisis del CD9, CD63, de EV perfiles superficiales CD81 para la discriminación de las subpoblaciones distintas de la glioma EV.

EVs fue manchado usando un protocolo robusto de la inmunofluorescencia, y la filtración de membrana simultánea fue utilizada para eliminar los anticuerpos excesivos desatados antes de análisis de IFCM.

La conveniencia de los anticuerpos fluoróforo-conjugados disponibles en el comercio para la única detección de EV fue validada por la luz y la microscopia electrónica correlativas. El análisis del multiparámetro IFCM fue optimizado con la integración de las fijaciones distintas del software para la única-EV caracterización robusta, práctica y simple.

Como se explica en el gorrón de vesículas extracelulares, CD9, CD63, y CD81 fluorescente-etiqueta único EVs manchado los anticuerpos en una moda superficial multiparametric de la proteína y habilitaron la detección de EVs triple-positivo así como escogen EVs positivo.

Después de establecer que IFCM puede descubrir diversos tetraspanins en único EVs, las personas analizaban los perfiles de la expresión del tetraspanin de EV en variedades de células del cáncer y células humanas del no-tumor, así como en las células ellos mismos.

Después de encontrar que las variedades de células del glioblastoma secretan EVs con diversos perfiles del tetraspanin comparó con las células normales, las personas decididas para probar si los perfiles del tetraspanin también están alterados en la circulación de EVs de pacientes del glioblastoma.

El “análisis de IFCM de EVs que expresaba CD9, CD63 o CD81 aislado de plasma paciente reveló niveles importante crecientes de CD63+ EVs en pacientes con el glioblastoma comparado con los donantes sanos,” denuncia a las personas. Una tendencia similar pero no importante fue observada para CD81.

Los números totales de CD63+/CD81+ y de CD9+/CD63+ doble-positivos EVs fueron aumentados de pacientes del glioblastoma y la proporción de tres diversas fracciones doble-positivas de EV fue elevada, con la combinación de CD63+/CD81+ siendo la más importante.

Los autores dicen que el estudio ofrece el prueba-de-principio para la viabilidad de usar IFCM para determinar a las subpoblaciones distintas de EV que circulan en la sangre de los pacientes de la glioma.

“Actualmente, exploraciones periódicas de MRI siguen a los pacientes de la glioma, y la detección de lesiones sospechosas requiere biopsia invasor o resección del tumor para la confirmación diagnóstica,” escriben.

EVs, por otra parte, que se puede obtener fácilmente por biopsia líquida, “podría convertirse en una opción no invasor para ofrecer la información dinámica en el estado del tumor y su perfil molecular,” concluye Lamszus y a las personas.

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