Aplicações de BiFC

Em quase todos os processos celulares, envolve uma rede complexa da proteína. Diversas tecnologias da selecção da alto-produção estão no uso para descobrir as redes enormes da interacção da proteína. O ensaio bimolecular da complementação da fluorescência (BiFC) foi usado extensivamente encontrando a interacção entre proteínas em pilhas vivas. O ensaio de BiFC é útil para visualizar interacções entre uma escala das proteínas em posições subcelulares diversas numerosas e entre muitos outros organismos. Os estudos provaram as aplicações mais largas do ensaio de BiFC.

Crédito: Vshivkova/Shutterstock.com

Usando ensaios de BiFC, diversos sistemas do vector foram desenvolvidos nas plantas. No thaliana do A., uma selecção alta da produção foi feita usando o ensaio e o BiFC de YTH para traçar a interacção da proteína com as proteínas do ciclo de pilha do núcleo. BiFC é serido provavelmente para todo o estudo que envolve as pilhas crescidas aeròbia e os organismos que poderiam genetically ser alterados expressando proteínas da fusão.

Encontrando a localização subcelular

A aplicação simples da análise de BiFC é encontrar se a interacção pode ocorrer entre duas proteínas em uma pilha viva. Geralmente, a análise de BiFC identifica a localização subcelular de complexos da proteína. Em todos os compartimentos subcelulares principais de pilhas mamíferas tais como lisosomas, o golgi, diversas estruturas subnuclear, a membrana de plasma, as mitocôndria, o lamellipodia, o segundo estômago endoplasmic, as gotas do lipido, e as partículas virais, complexos de BiFC foram visualizados. Os complexos de BiFC mostraram a introspecção significativa nos regulamentos complexos da localização que incluem a translocação nuclear também.

Os resultados mostraram que os complexos de BiFC podem ser formados em compartimentos celulares diversos em vários ambientes. É interessante notar que a análise de BiFC não leva em consideração as limitações topológicas das proteínas como as interacções que incluem proteínas integrais da membrana são estudadas usando a análise de BiFC.

Interacções individuais visualizando

Muitas proteínas actuam junto com o grande número de sócios dissimilares. Quando interagirem, a quantidade de interacções gera uma rede complexa das relações e os sinais são impor em uma única proteína, que sãos por completo a rede. Nesta rede complexa, visualizado uma interacção individual fornecerá a introspecção na associação entre uma interacção particular e sobre os sinais que ajustam suas localização e eficácia. A análise de BiFC é útil visualizar muitas interacções que envolvem componentes diffusible destas redes e dos receptors da membrana.

Detectando a interacção da proteína na citocinese

Usando a análise de BiFC, o complexo criado por Grr1 e Hof1 são visualizados. Durante o ciclo, na fase G2-M, a interacção de Grr1 com Hof1 ocorrerá. Devido a este relacionamento, degradação de Hof1 acontecerá. Os processos subseqüentes podem ser visualizados demonstrando que a análise de BiFC é útil em encontrar para fora a formação complexa temporal e espacial controlada.

Interacções do andaime

Diversas proteínas podiam ser trazidas mais perto junto devido ao emperramento do serviço similar do sócio da interacção como um andaime para o conjunto dos complexos do multiprotein. A não ser proteínas, estes andaimes são aplicáveis para hidratos de carbono, ácidos nucleicos, e outras macromoléculas celulares. A análise de BiFC detecta este o emperramento simultâneo das duas proteínas nas proximidades de uma outro no mesmo andaime. Usando este princípio, o emperramento do RNA é detectado fundindo fragmentos fluorescentes da proteína às duas proteínas RNA-obrigatórias. A aproximação para projectar as proteínas da fusão que poderiam ligar a um único tipo de molécula do RNA é usada seguindo o RNA dentro das pilhas vivas.

Estudando organismos

Muitos organismos da única pilha e da multi pilha foram estudados usando o ensaio de BiFC. Diversas interacções foram visualizadas nas bactérias - tumefaciens, Escherichia Coli, e bacillus-subtilis da agrobactéria; e fungos - chrysogenum de Acremonium, grisea de Magnaporthe, nidulans de Saccharomyces Cerevisiae, e de aspergilo. Muitas espécies de plantas foram estudadas usando a análise de BiFC para visualizar as interacções abundantes que ocorrem entre estes organismos eucarióticas mais altos. Usando a análise de BiFC, os elegans de Caenorhabditis com interacções da proteína enlatam igualmente visualizado.

Ferramenta da selecção

Os ensaios de BiFC encontram seu uso em identificar sócios possíveis da interacção e modificadores de interacções identificadas, assim actuando como uma ferramenta da selecção. Esta estratégia ajudou a identificar muitos sócios novos da interacção. Os moduladores pequenos da molécula são seleccionados igualmente usando a análise de BiFC. Encontrou-se que a análise de BiFC é uma estratégia prática para identificar moléculas pequenas na pilha viva que está alterando os complexos particulares da proteína.

Ensaio multicolorido de BiFC: Visualização simultâneo

A maioria das proteínas têm muitos sócios possíveis da interacção. Em muitos casos, uma proteína interage com a uma molécula de proteína específica, isto é, as interacções são mutuamente exclusivos. Usando o ensaio multicolorido de BiFC, é possível visualizar simultaneamente as interacções entre complexos múltiplos da proteína da mesma pilha; as distribuições subcelulares dos complexos numerosos da proteína (na mesma pilha) podem ser comparadas; a competição entre os sócios (mutuamente exclusivos) da interacção ligar para um sócio universal pode ser analisada.

BiFC tornou possível detectar in vivo e visualizar interacções da proteína-proteína. Combinando com o avanço o mais atrasado na microscopia de fluorescência, a análise de BiFC podia oferecer introspecções novas em interacções de regulamento da proteína-proteína da descoberta da droga. As novas aplicações para o ensaio de BiFC estão crescendo ràpida. O uso da proteína fluorescente diversa é necessário para executar o estudo comparativo de ensaios de BiFC para medir suas vantagens.

Fontes

  1. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4417415/
  2. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2829326/
  3. http://www.vanderbilt.edu/cbi/Presentations/EmPresentation.pdf
  4. http://www.pai.utexas.edu/faculty/isaxena/BIO320/BiFC%20analysis%20as%20a%20probe%20of%20protein%20interactions%20in%20living%20cells%20-%202008.pdf

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Last Updated: Feb 26, 2019

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