Méthodologie de CLARTÉ

La technique de CLARTÉ est une technique employée pour libérer des tissus des lipides et pour activer immunolabelling des organes entiers et intacts. Ceci a des avantages par rapport aux méthodes traditionnelles, qui ont toujours dépendu de découper le tissu et de le reconstruire en tranches à une date ultérieure - ayant pour résultat la déformation et l'inexactitude de tissu.

Illustration de lhakusanto | Shutterstock

Lipide-mélangé, anatomiquement rigide, représentation/immunohistochimique compatible, méthode d'hydrogel de tissu (CLARTÉ) a été au commencement conçu en 2013 par Chung et Deisseroth à l'École de Médecine d'Université de Stanford. Utilisant ce procédé, des organes post mortem peuvent être marqués pour des protéines et des acides nucléiques, permettant à l'analyse des échantillons intacts de produire les images 3D détaillées.

Méthodologie

Chaque étape de la technique de CLARTÉ est donnée ci-dessous :

Fixation de tissu

La première étape dans ce procédé est d'infuser le prélèvement de tissu avec des monomères d'hydrogel (tels que l'acrylamide ou le bisacrylamide) et le formaldéhyde. Dans tout ce procédé, le formaldéhyde est très important, car il réticule le tissu et le grippement les monomères d'hydrogel aux protéines et aux acides nucléiques.

La prochaine étape comporte la polymérisation dans une maille d'hydrogel, s'assurant éventuel que le tissu reste intact, maintenant la structure originelle de l'organe et veillant que les positions des protéines et des acides nucléiques ne sont pas modifiées.

Démontage de lipide

Les monomères d'hydrogel utilisés dans l'étape de fixation de tissu ne grippent pas aux lipides et à d'autres biomolécules qui manquent des groupes fonctionnels spécifiques. C'est important car il tient compte pour que des lipides soient retirés. Ceci est réalisé par une technique ionique nouvelle d'extraction, dans laquelle des tissus sont traités avec le SDS et un courant électrique est fait fonctionner, transportant les lipides hors du tissu.

Sans courant, le procédé passif prend environ 2 semaines et pour cette raison le courant électrique est très important en accélérant le procédé général. Le SDS a des qualités liphophiles, signifiant qu'il grippe aux lipides et les transporte hors du tissu. Ceci rend le tissu transparent, permettant l'analyse au microscope. Cependant, pendant que des protéines et les acides nucléiques sont fixés en place, elles ne sont pas enlevées.

Réfection de tissu

Dans tout ce procédé de préparation, le tissu agrandit, exigeant la réfection par la demande de règlement dans une solution assortie réfractée d'index. Une fois retourné aux cotes originelles, l'échantillon peut alors être employé pour la représentation.

Préparation de représentation

Une fois que le tissu est remis, il peut alors être employé dedans pour la représentation des biomolécules variés. Ceci peut être par des méthodes variées, telles que l'immunofluorescence utilisant les anticorps étiquetés, ou par des marques d'acide nucléique. Une fois que marqué, des images peuvent alors être saisies utilisant l'immunofluorescence ou les techniques d'imagerie normale.

Analyser les résultats

De façon générale, cette technique mène au rétablissement de haute qualité, hautement détaillé, les images 3D des organes intacts. Une fois qu'une image est obtenue, les premiers anticorps peuvent être éliminés, et les deuxièmes anticorps peuvent être appliqués, menant à la production des résultats multiples selon le prélèvement de tissu.

Par conséquent, cette technique peut produire des images précises et fiables expliquant la protéine et l'emplacement et l'interaction d'acide nucléique, tout en fournissant d'autres caractéristiques sur les structures sous-cellulaires, et des transmissions entre différentes cellules structurelles.

Cette technique a été appliquée dans beaucoup de domaines de recherche, tels que la maladie d'Alzheimer, la sclérose en plaques, et la recherche d'autisme. En outre, elle peut également être employée au-dessus d'un large éventail d'organes (rate y compris, cerveau, pancréas, et testicule), dans d'autres organismes (tels que Zebrafish) et aux centrales. Par conséquent, les futures applications potentielles de la CLARTÉ sont sans fin et très prometteuses.

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Last Updated: Jan 8, 2019

Hannah Simmons

Written by

Hannah Simmons

Hannah is a medical and life sciences writer with a Master of Science (M.Sc.) degree from Lancaster University, UK. Before becoming a writer, Hannah's research focussed on the discovery of biomarkers for Alzheimer's and Parkinson's disease. She also worked to further elucidate the biological pathways involved in these diseases. Outside of her work, Hannah enjoys swimming, taking her dog for a walk and travelling the world.

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