Metodologia da CLARIDADE

A técnica da CLARIDADE é uma técnica usada para cancelar tecidos dos lipidos e para permitir immunolabelling de órgãos inteiros, intactos. Isto tem vantagens sobre os métodos tradicionais, que dependeram sempre em cima de cortar o tecido e do reconstruir em um outro dia - tendo por resultado a distorção e a irregularidade do tecido.

Ilustração do cérebro humano - cérebros inteiros são analisados usando a CLARIDADE - pelo hakusantohakusanto | Shutterstock

Lipido-trocada, anatômica rígido, imagem lactente/immunostaining compatível, método do hydrogel do tecido (CLARIDADE) foi projectada inicialmente em 2013 por Chung e por Deisseroth na Faculdade de Medicina da Universidade de Stanford. Usando este processo, os órgãos post-mortem podem ser etiquetados para proteínas e ácidos nucleicos, permitindo a análise de amostras intactos de criar as imagens 3D detalhadas.

Metodologia

Cada fase da técnica da CLARIDADE é esboçada abaixo:

Fixação do tecido

A primeira etapa neste processo é infundir a amostra de tecido com os monómeros do hydrogel (tais como o acrilamido ou o bisacrylamide) e o formaldeído. Durante todo este processo, o formaldeído é muito importante, porque liga o tecido e o emperramento os monómeros do hydrogel às proteínas e aos ácidos nucleicos.

A fase seguinte envolve a polimerização em uma malha do hydrogel, assegurando-se de finalmente que o tecido permaneça intacto, retendo a estrutura original do órgão e se certificando de que as posições das proteínas e de ácidos nucleicos não estão alteradas.

Remoção do lipido

Os monómeros do hydrogel usados na fase da fixação do tecido não ligam aos lipidos e às outras biomoléculas que faltam grupos funcionais específicos. Isto é importante porque permite lipidos ser removido. Isto é conseguido por uma técnica iónica nova da extracção, em que os tecidos são tratados com o SDS e uma corrente elétrica é executada completamente, levando os lipidos fora do tecido.

Sem a corrente, o processo passivo toma ao redor 2 semanas e conseqüentemente a corrente elétrica é muito importante em acelerar o processo total. O SDS tem as qualidades lipofílicas, significando que liga aos lipidos e os leva fora do tecido. Isto faz o tecido transparente, permitindo a análise microscópica. Contudo, como as proteínas e os ácidos nucleicos são fixados no lugar, não são removidas.

Restauração do tecido

Durante todo este processo da preparação, o tecido amplia, exigindo a restauração com o tratamento em uma solução de harmonização refratada do deslocamento predeterminado. Retornado uma vez às dimensões originais, a amostra pode então ser usada para a imagem lactente.

Preparação da imagem lactente

Uma vez que o tecido é restaurado, pode então ser usado dentro para a imagem lactente de várias biomoléculas. Isto pode ser com os vários métodos, tais como a imunofluorescência usando anticorpos etiquetados, ou por etiquetas do ácido nucleico. Uma vez que etiquetado, as imagens podem então ser capturadas usando técnicas padrão da imunofluorescência ou de imagem lactente.

Analisando os resultados

Total, esta técnica conduz à geração de alta qualidade, altamente detalhada, imagens 3D de órgãos intactos. Uma vez que uma imagem é obtida, os primeiros anticorpos podem ser removidos, e os segundos anticorpos podem ser aplicados, conduzindo à produção de resultados múltiplos pela amostra de tecido.

Conseqüentemente, esta técnica pode produzir as imagens exactas, seguras que demonstram a proteína e o lugar e a interacção do ácido nucleico, ao fornecer uns dados mais adicionais em estruturas subcelulares, e umas comunicações entre pilhas estruturais diferentes.

Esta técnica foi aplicada em muitas áreas de pesquisa, tais como a doença de Alzheimer, a esclerose múltipla, e a pesquisa do autismo. Além disso, pode igualmente ser usada sobre uma vasta gama de órgãos (que incluem o baço, o cérebro, o pâncreas, e o testículo), em outros organismos (tais como Zebrafish) e nas plantas. Conseqüentemente, as aplicações futuras potenciais da CLARIDADE são infinitas e muito prometedoras.

Fontes

Further Reading

Last Updated: Jan 8, 2019

Hannah Simmons

Written by

Hannah Simmons

Hannah is a medical and life sciences writer with a Master of Science (M.Sc.) degree from Lancaster University, UK. Before becoming a writer, Hannah's research focussed on the discovery of biomarkers for Alzheimer's and Parkinson's disease. She also worked to further elucidate the biological pathways involved in these diseases. Outside of her work, Hannah enjoys swimming, taking her dog for a walk and travelling the world.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Simmons, Hannah. (2019, January 08). Metodologia da CLARIDADE. News-Medical. Retrieved on May 24, 2020 from https://www.news-medical.net/life-sciences/CLARITY-Methodology.aspx.

  • MLA

    Simmons, Hannah. "Metodologia da CLARIDADE". News-Medical. 24 May 2020. <https://www.news-medical.net/life-sciences/CLARITY-Methodology.aspx>.

  • Chicago

    Simmons, Hannah. "Metodologia da CLARIDADE". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/CLARITY-Methodology.aspx. (accessed May 24, 2020).

  • Harvard

    Simmons, Hannah. 2019. Metodologia da CLARIDADE. News-Medical, viewed 24 May 2020, https://www.news-medical.net/life-sciences/CLARITY-Methodology.aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News Medical.