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Analyses de métabolisme de cellules

Le métabolisme de cellules est essentiel pour la physiologie normale dans tous les organismes. Beaucoup de différentes analyses sont employées pour trouver et métabolisme cellulaire de mesure, selon la métabolite étant vérifiée.

Crédit d'image : Vshivkova/Shutterstock

Dépistage de glucose

(2 (n (7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl) aminé) - 2-Deoxyglucose) analyse 2-NBDG

La mesure de la prise de glucose à l'intérieur des cellules est importante pour évaluer plusieurs procédés biologiques et leurs conditions de la maladie. Par exemple, la prise de mesure de glucose pendant le diabète est critique. 2-NBDG est une protéine fluorescente et un analogue de glucose.

Dans cette analyse, 2-NBDG est directement incubé avec les cellules. Après une certaine heure, l'intensité de fluorescence à l'intérieur des cellules est mesurée utilisant la cytométrie de flux. Cette analyse est également employée pour mesurer les changements de la prise de glucose en présence de différents antidiabétiques.

Analyse d'oxydase de glucose

10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine est un substrat de peroxydase. Pendant que des réactions d'oxydase et de peroxydase de glucose sont accouplées, cette analyse peut être employée pour mesurer l'activité et les taux de glucose de glucose à l'intérieur des cellules, de la nourriture, et des fluides corporels.

Dans cette analyse, l'oxydase de glucose réagit avec du glucose pour produire du peroxyde de hydrogène. Le peroxyde de hydrogène réagit alors avec du réactif (rouge d'Ampex) pour produire d'un resorufin appelé de protéine fluorescente rouge. Les niveaux de cette protéine fluorescente rouge peuvent alors être employés pour analyser les niveaux du glucose.

Cholestérol

Analyse de peroxyde de hydrogène de cholestérol

Le cholestérol existe à l'intérieur des cellules comme cholestérol libre et esters de cholestérol. Cette analyse emploie un composé qui réagit avec HO22 produit par oxydation de cholestérol et produit un composé fluorescent.

Cette analyse peut mesurer le cholestérol libre et les esters de cholestérol et est extrêmement sensible ; pouvant trouver même des quantités de cholestérol très petites (200 nanomètre). Il a l'autoflourescence minimal et la fluorescence peut être mesurée aux remarques multiples de temps.

Analyse de la phospholipase C (PC-PLC) de Phosphatidylcholine-Détail

Dans cette analyse, 10 acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine sont employés comme sonde. PC-PLC peut convertir la phosphatidylcholine en phosphocholine et diacylglycerol.

La phosphatase alcaline convertit alors le phophorylcholine en choline qui est alors oxydée pour former le peroxyde de hydrogène. Ce peroxyde de hydrogène peut alors réagir avec 10 acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine pour former un resorufin appelé de protéine fluorescente rouge.

Le signe fluorescent peut être trouvé utilisant le microcopy pour analyser l'activité de phospholipase-c. L'analyse de PC-PLC est une analyse sensible avec l'autoflourescence minimal.

Dépistage d'ATP

Cette analyse emploie le luciferase recombiné de luciole et son substrat (D-luciferin) pour déterminer les niveaux d'ATP à l'intérieur des cellules. Luciferase produit la lumière en présence de l'ATP. Cette analyse est très sensible et peut trouver 0,1 picomoles d'ATP préexistant ou d'ATP récemment formé.

Cette analyse peut être employée pour trouver des changements d'ATP pendant des réactions enzymatiques et la contamination bactérienne différentes de sang, de lait, d'urine, et de saleté. Elle peut également être employée pour analyser la prolifération cellulaire, la cytotoxicité, les effets des antibiotiques et les médicaments anticancéreux.

analyse d'oxydase de Galactose-galactose

Cette analyse est employée pour trouver les niveaux de la galactose à l'intérieur des cellules. Dans cette analyse, l'oxydase de galactose est employée pour catalyser la galactose pour produire du peroxyde de hydrogène.

Le peroxyde de hydrogène réagit alors avec le composé rouge d'Ampex pour produire d'un resorufin appelé de protéine fluorescente rouge. La fluorescence du resorufin sont mesurées et employées comme indicateur des niveaux de la galactose dans l'échantillon.

Aussi bien que le métabolisme de cellules, l'analyse d'oxydase de galactose-galactose peut être employée pour étudier la signalisation de cellules, neurobiologie, inflammations, fonction immunitaire. La fluorescence produite par le resorufin est stable au moins à 3 heures.

Analyse de peroxyde de hydrogène

L'analyse de peroxyde de hydrogène de relation étroite est une technique sensible pour trouver les niveaux du peroxyde de hydrogène à l'intérieur des cellules. Cette analyse emploie un rouge d'Ampex de réactif qui réagit avec du peroxyde de hydrogène pour produire d'un resorufin appelé de protéine fluorescente rouge.

Les niveaux du resorufin peuvent être employés comme indicateur pour mesurer HO22 les niveaux. C'est une analyse très sensible dont peut mesurer même 10 picomoles HO22.

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Last Updated: Feb 26, 2019

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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