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Analisi del metabolismo delle cellule

Il metabolismo delle cellule è essenziale per la fisiologia normale in tutti gli organismi. Molte analisi differenti sono usate per individuare e misurare il metabolismo cellulare, secondo il metabolita che è studiato.

Credito di immagine: Vshivkova/Shutterstock

Rilevazione del glucosio

analisi 2-NBDG (2 (N (7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl) amminico) - 2-Deoxyglucose)

La misurazione dell'assorbimento del glucosio dentro le celle è importante da valutare parecchi trattamenti biologici ed i loro stati di malattia. Per esempio, l'assorbimento di misurazione del glucosio durante il diabete è critico. 2-NBDG è una proteina fluorescente e un analogo del glucosio.

In questa analisi, 2-NBDG direttamente è incubato con le celle. Dopo un certo tempo, l'intensità della fluorescenza dentro le celle è misurata facendo uso di citometria a flusso. Questa analisi egualmente è usata per misurare i cambiamenti nell'assorbimento del glucosio in presenza delle droghe antidiabetiche differenti.

Analisi dell'ossidasi di glucosio

10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine è un substrato della perossidasi. Mentre sia le reazioni dell'ossidasi che della perossidasi di glucosio coppia, questa analisi può essere usata per misurare l'attività del glucosio ed i livelli del glucosio dentro le celle, l'alimento ed i liquidi corporei.

In questa analisi, l'ossidasi di glucosio reagisce con glucosio per generare il perossido di idrogeno. Il perossido di idrogeno poi reagisce con un reagente (rosso di Ampex) per generare una proteina fluorescente rossa chiamata resorufin. I livelli di questa proteina fluorescente rossa possono poi essere usati per analizzare i livelli di glucosio.

Colesterolo

Analisi del idrogeno-perossido del colesterolo

Il colesterolo esiste dentro le celle come colesterolo ed esteri liberi del colesterolo. Questa analisi usa un composto che reagisce con UFF22 prodotto dall'ossidazione di colesterolo e produce un composto fluorescente.

Questa analisi può misurare sia il colesterolo libero che gli esteri del colesterolo ed è altamente sensibile; potendo individuare anche le quantità di colesterolo molto piccole (200 nanometro). Ha autoflourescence minimo e la fluorescenza può essere misurata ai punti multipli di tempo.

Analisi Fosfatidilcolina-Specifica della fosfolipasi C (PC-PLC)

In questa analisi, 10 acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine sono usati come sonda. PC-PLC può convertire la fosfatidilcolina in phosphocholine e in diacylglycerol.

La fosfatasi alcalina poi converte il phophorylcholine in colina che poi è ossidata per formare il perossido di idrogeno. Questo perossido di idrogeno può poi reagire con 10 acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine per formare una proteina fluorescente rossa chiamata resorufin.

Il segnale fluorescente può essere individuato facendo uso del microcopy per analizzare l'attività della fosfolipasi-c. L'analisi di PC-PLC è un'analisi sensibile con il autoflourescence minimo.

Rilevazione del trifosfato di adenosina

Questa analisi usa il luciferase recombinante della lucciola ed il suo substrato (D-luciferin) per determinare i livelli del trifosfato di adenosina dentro le celle. Luciferase produce l'indicatore luminoso in presenza del trifosfato di adenosina. Questa analisi è molto sensibile e può individuare 0,1 picomole del trifosfato di adenosina preesistente o del trifosfato di adenosina formato di recente.

Questa analisi può essere usata per individuare i cambiamenti del trifosfato di adenosina durante le reazioni enzimatiche differenti e la contaminazione batterica nel sangue, in latte, in urina ed in terreno. Può anche essere usata per analizzare la proliferazione delle cellule, la citotossicità, gli effetti degli antibiotici e le droghe anticancro.

analisi dell'ossidasi del Galattosio-galattosio

Questa analisi è usata per individuare i livelli di galattosio dentro le celle. In questa analisi, l'ossidasi del galattosio è usata per catalizzare il galattosio per generare il perossido di idrogeno.

Il perossido di idrogeno poi reagisce con il composto rosso di Ampex per generare una proteina fluorescente rossa chiamata resorufin. La fluorescenza di resorufin è misurata ed utilizzata come indicatore dei livelli di galattosio nel campione.

Così come il metabolismo delle cellule, l'analisi dell'ossidasi del galattosio-galattosio può essere usata per studiare la segnalazione delle cellule, la neurobiologia, le infiammazioni, funzione immune. La fluorescenza generata da resorufin è stabile almeno a 3 ore.

Analisi del perossido di idrogeno

L'analisi del perossido di idrogeno del legame è un metodo sensibile per individuare i livelli di perossido di idrogeno dentro le celle. Questa analisi usa un rosso di Ampex del reagente che reagisce con il perossido di idrogeno per generare una proteina fluorescente rossa chiamata resorufin.

I livelli di resorufin possono essere usati come indicatore per misurare i livelli22 NOIOSI. Ciò è un'analisi molto sensibile che può misurare anche 10 picomoles di UFF22.

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Last Updated: Feb 26, 2019

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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