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Análisis del metabolismo de la célula

El metabolismo de la célula es esencial para la fisiología normal en todos los organismos. Muchos diversos análisis se utilizan para descubrir y para medir metabolismo celular, dependiendo del metabilito que es investigado.

Haber de imagen: Vshivkova/Shutterstock

Detección de la glucosa

(2 (n (7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl) amino) - 2-Deoxyglucose) análisis 2-NBDG

La medición de la absorción de la glucosa dentro de las células es importante evaluar varios procesos biológicos y sus estados de la enfermedad. Por ejemplo, la absorción de medición de la glucosa durante la diabetes es crítica. 2-NBDG es una proteína fluorescente y un análogo de la glucosa.

En este análisis, 2-NBDG se incuba directamente con las células. Después de una cierta hora, la intensidad de la fluorescencia dentro de las células se mide usando cytometry de flujo. Este análisis también se utiliza para medir los cambios en la absorción de la glucosa en presencia de diversas drogas antidiabéticas.

Análisis de la oxidasis de glucosa

10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine es un substrato de la peroxidasa. Mientras que se acoplan las reacciones de la oxidasis y de la peroxidasa de glucosa, este análisis se puede utilizar para medir actividad de la glucosa y niveles de la glucosa dentro de las células, de la comida, y de los líquidos corporales.

En este análisis, la oxidasis de glucosa reacciona con glucosa para generar el peróxido de hidrógeno. El peróxido de hidrógeno entonces reacciona con un reactivo (rojo de Ampex) para generar una proteína fluorescente roja llamada resorufin. Los niveles de esta proteína fluorescente roja se pueden entonces utilizar para analizar los niveles de glucosa.

Colesterol

Análisis del hidrógeno-peróxido del colesterol

El colesterol existe dentro de las células como el colesterol y ésteres libres del colesterol. Este análisis utiliza una composición que reaccione con HO22 producido por la oxidación del colesterol y produzca una composición fluorescente.

Este análisis puede medir el colesterol libre y los ésteres del colesterol y es altamente sensible; pudiendo descubrir incluso cantidades muy pequeñas del colesterol (200 nanómetro). Tiene autoflourescence mínimo y la fluorescencia se puede medir en los puntos múltiples del tiempo.

Análisis Fosfatidilcolina-Específico de la fosfolipasa C (PC-PLC)

En este análisis, 10 acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine se utilizan como antena. PC-PLC puede convertir la fosfatidilcolina al phosphocholine y al diacylglycerol.

La fosfatasa alcalina entonces convierte phophorylcholine a la colina que entonces se oxida para formar el peróxido de hidrógeno. Este peróxido de hidrógeno puede entonces reaccionar con 10 acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine para formar una proteína fluorescente roja llamada resorufin.

La señal fluorescente se puede descubrir usando el microcopy para analizar la actividad de la fosfolipasa-c. El análisis de PC-PLC es un análisis sensible con autoflourescence mínimo.

Detección del ATP

Este análisis utiliza el luciferase recombinante y su substrato (D-luciferin) de la luciérnaga para determinar los niveles del ATP dentro de las células. Luciferase produce la luz en presencia del ATP. Este análisis es muy sensible y puede descubrir 0,1 picomoles del ATP preexistente o del ATP recién formado.

Este análisis se puede utilizar para descubrir cambios del ATP durante diversas reacciones enzimáticas y la contaminación bacteriana en sangre, leche, orina, y suelo. Puede también ser utilizado para analizar la proliferación de célula, la citotoxicidad, efectos de antibióticos y las drogas anticáncer.

análisis de la oxidasis de la Galactosa-galactosa

Este análisis se utiliza para descubrir los niveles de galactosa dentro de las células. En este análisis, la oxidasis de la galactosa se utiliza para catalizar la galactosa para generar el peróxido de hidrógeno.

El peróxido de hidrógeno entonces reacciona con la composición roja de Ampex para generar una proteína fluorescente roja llamada resorufin. La fluorescencia del resorufin se mide y se utiliza como indicador de los niveles de galactosa en la muestra.

Así como metabolismo de la célula, el análisis de la oxidasis de la galactosa-galactosa se puede utilizar para estudiar la transmisión de señales de la célula, neurobiología, inflamaciones, función inmune. La fluorescencia generada por el resorufin es estable por lo menos a 3 horas.

Análisis del peróxido de hidrógeno

El análisis del peróxido de hidrógeno del amarre es un método sensible para descubrir los niveles de peróxido de hidrógeno dentro de las células. Este análisis utiliza un rojo de Ampex del reactivo que reaccione con el peróxido de hidrógeno para generar una proteína fluorescente roja llamada resorufin.

Los niveles de resorufin se pueden utilizar como indicador para medir HO22 los niveles. Éste es un análisis muy sensible del cual puede medir incluso 10 picomoles HO22.

Fuentes:

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Last Updated: Feb 26, 2019

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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