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Choix d'une surface de phase stationnaire pour HILIC

La composition chimique de la phase stationnaire dans HILIC est souvent plus complexe que la chromatographie liquide haute performance traditionnelle (HPLC) et emploie une combinaison des différentes molécules qui agissent l'un sur l'autre avec des analytes pour réaliser la séparation maximum en travers de plusieurs paramètres.

Molécules pour la séparation dans HILICAris Suwanmalee | Shutterstock

Presque n'importe quelle surface chromatographique polaire peut être employée dans HILIC, qui se compose souvent de la silice nue. La silice peut être modifiée en ajoutant les groupes fonctionnels extérieurs pour augmenter ou abaisser la force d'interaction entre la phase stationnaire et l'analyte ou le solvant peut être employé pour régler avec précision le temps d'assemblage et pour améliorer la séparation entre les composés.

Modes de séparation

Beaucoup d'interactions physico-chimiques peuvent être exploitées dans HILIC pour séparer des molécules dans un échantillon. Le choix de la phase stationnaire dépend des molécules à séparer et du solvant (phase mobile), car la séparation se produit par des forces différentes d'assemblage entre les molécules avec la phase stationnaire.  

Séparation basée sur des interactions chimiques et matérielles

Les interactions chimiques qui contribuent au temps d'assemblage dans le fléau de HILIC comprennent l'adhérence d'hydrogène entre les interactions d'un donneur de proton et d'accepteur et de donneur-accepteur d'hydrogène entre l'accepteur d'électron de base de Lewis et le donneur appareillent.

Les interactions matérielles entre les molécules témoin et la phase mobile avec la phase stationnaire se composent des interactions électroniques entre un doublet et un deuxième doublet ou ion, et les forces de Van der Waals. Ce type d'interaction est employé en séparant la substance chargée et polaire.

Des forces hydrophobes et hydrophiles, principales à HILIC, sont également considérées des interactions matérielles. Des analytes sont séparées par ordre polarité par des phases stationnaires (polaires) hydrophiles.

Phases stationnaires de silice

Le silicagel est le substrat le plus courant à partir dont des phases stationnaires sont effectuées dans tous les types de chromatographie sur colonne, dû à sa structure poreuse. La silice nue peut être employée comme phase stationnaire dans HILIC dû à la formation des groupes de silanol sur les surfaces exposées, le rendant hautement polaire. Les trois types courants de silicagel, différant dans leur préparation, se nomment le type A, B, et C.

Tapez le silicagel d'A

Tapez les silicagels d'A contiennent des impuretés en métal comme ils sont précipités de la solution de silicate sans enlever des polluants. La présence des ions en métal active des groupes de silanol, et ils peuvent former des composés avec certains corps dissous de chélation. Ceci peut être exploité en fonctionnant avec des quelques peptides, car ils sont souvent hautement labiles et se brisent à part facilement sans chélation.

Silicagels du type B

Tapez les silicagels de B sont préparés par la totalisation des solutions colloïdales de silice en air et ainsi contenez bien moins impuretés. Des composés polaires sont bien séparés par des gels du type B. Le pH de la phase mobile peut également être réglé pour encourager les groupes de silanol d'ionisation sur la surface de la silice, effectuant à l'échange cationique un facteur important dans le temps d'assemblage.

Silicagels du type C

Des silicagels du type C sont modifiés pour posséder une surface hydrosilated composée des groupes non polaires d'hydrure de silicium. C'est utile quand une phase mobile avec la composition élevée de solvant organique doit être employée, et des analytes plus polaires s'éluent plus rapidement de ce type de fléau.

Phases stationnaires enduites de silice

Des phases stationnaires de silicagel peuvent être modifiées avec un grand choix de groupes fonctionnels pour régler finement la force d'assemblage selon des facteurs, tels que le hydrophobicity ou le pH. Une modification courante aux silicagels nus est la constitution d'un groupe d'hydroxyle sur la surface exposée de silanol pour produire un groupe de diol.

Les groupes de diol sont hautement polaires, protégé contre l'ionisation, et ont les propriétés intenses d'adhérence d'hydrogène. Ainsi, la polarité et l'adhérence d'hydrogène sont les facteurs primaires dans l'assemblage de fléau.

Des silicagels functionalized anioniques, obtenus par l'ajout des groupes aminés, sont également fréquemment employés dans HILIC. Ceci produit la substance chargée d'a négativement - surface chargée qui des causes franchement - à maintenir plus fortement que les composés fondamentaux.

Les phases stationnaires de Zwitterionic sont devenues de plus en plus utilisées dans HILIC et se composent du substrat de silice ou de polymère avec les molécules zwitterionic exposées comme, sulfoalkylbetaine. Les phases stationnaires de Zwitterionic sont hautement polaires et les interactions d'échange ionique sont courantes. Elles expliquent un rendement plus grand de fléau et excellente une séparation comparés à d'autres types de fléau.

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Last Updated: Feb 1, 2019

Michael Greenwood

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Michael Greenwood

Michael graduated from Manchester Metropolitan University with a B.Sc. in Chemistry in 2014, where he majored in organic, inorganic, physical and analytical chemistry. He is currently completing a Ph.D. on the design and production of gold nanoparticles able to act as multimodal anticancer agents, being both drug delivery platforms and radiation dose enhancers.

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