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Escolhendo uma superfície da fase estacionária para HILIC

A composição quimica da fase estacionária em HILIC é frequentemente mais complexa do que a cromatografia líquida de capacidade elevada tradicional (HPLC) e usa uma combinação de moléculas diferentes que interagem com os analytes para conseguir a separação máxima através de diversos parâmetros.

Moléculas para a separação em HILICAris Suwanmalee | Shutterstock

Quase toda a superfície cromatográfica polar pode ser usada em HILIC, que consiste frequentemente no silicone desencapado. O silicone pode ser alterado adicionando os grupos funcionais de superfície para aumentar ou abaixar a força da interacção entre a fase estacionária e o analyte ou o solvente pode ser usada para ajustar o tempo de retenção e para melhorar a separação entre compostos.

Modos de separação

Muitas interacções físico-químicas podem ser exploradas em HILIC para separar moléculas em uma amostra. A escolha da fase estacionária depende em cima das moléculas a ser separados e do solvente (fase móvel), porque a separação ocorre com as forças de deferimento da retenção entre moléculas com a fase estacionária.  

Separação baseada em interacções químicas e físicas

As interacções químicas que contribuem ao tempo de retenção dentro da coluna de HILIC incluem a ligação do hidrogênio entre interacções de um doador do protão e do autómato e do doador-autómato do hidrogênio entre o autómato do elétron da base de Lewis e o doador emparelham-se.

As interacções físicas entre moléculas da amostra e a fase móvel com a fase estacionária consistem em interacções eletrônicas entre um dipolo e um segundo dipolo ou íon, e forças de Van der Waals. Este tipo de interacção é usado ao separar a espécie cobrada e polar.

As forças hidrofóbicas e hidrófilas, fundamentais a HILIC, são consideradas igualmente ser interacções físicas. Os Analytes são separados por ordem da polaridade em fases estacionárias (polares) hidrófilas.

Fases estacionárias do silicone

O gel de silicone é a carcaça a mais comum de que as fases estacionárias são feitas em todos os tipos de cromatografia de coluna, devido a sua estrutura porosa. O silicone desencapado pode ser usado como uma fase estacionária em HILIC devido à formação de grupos do silanol em superfícies expor, fazendo o altamente polar. Os três tipos comuns de gel de silicone, diferindo em sua preparação, são denominados o tipo A, B, e C.

Dactilografe o gel de silicone de A

Dactilografe geles de silicone de A contêm impurezas do metal como são precipitados da solução do silicato sem remover os poluentes. A presença de íons do metal activa grupos do silanol, e podem formar complexos com determinados solutes chelating. Isto pode ser explorado ao trabalhar com alguns peptides, porque são frequentemente altamente labile e quebram distante facilmente sem quelação.

Dactilografe geles de silicone de B

O tipo geles de silicone de B é preparado com a agregação de soluções coloidais do silicone no ar e assim que contenha distante menos impurezas. Os compostos polares são separados bem pelo tipo geles de B. O pH da fase móvel pode igualmente ser ajustado para incentivar os grupos do silanol da ionização na superfície do silicone, fazendo a troca de cation um factor importante no tempo de retenção.

Dactilografe geles de silicone de C

O tipo geles de silicone de C é alterado para possuir uma superfície hydrosilated compo de grupos não-polares do hidruro do silicone. Isto é útil quando uma fase móvel com composição alta do solvente orgânico deve ser usada, e uns analytes mais polares elute mais rapidamente deste tipo de coluna.

Fases estacionárias do silicone revestido

As fases estacionárias de gel de silicone podem ser alteradas com uma variedade de grupos funcionais para ajustar finamente a força da retenção segundo factores, tais como o hydrophobicity ou o pH. Uma alteração comum aos geles de silicone desencapados é a incorporação de um grupo de hidróxilo à superfície expor do silanol para criar um grupo do diol.

Os grupos do Diol são altamente polares, protegido da ionização, e têm propriedades fortes da ligação do hidrogênio. Assim, a polaridade e a ligação do hidrogênio são os factores preliminares na retenção da coluna.

Os geles de silicone functionalized aniónicos, obtidos pela adição de grupos aminados, são usados igualmente freqüentemente em HILIC. Isto cria a espécie cobrada da negativamente - superfície cobrada que causas positivamente - a ser retida mais fortemente do que compostos básicos.

As fases estacionárias de Zwitterionic tornaram-se usadas cada vez mais em HILIC e consistem na carcaça do silicone ou do polímero com as moléculas zwitterionic expor como, sulfoalkylbetaine. As fases estacionárias de Zwitterionic são altamente polares e as interacções da troca iónica são comuns. Demonstram a maior eficiência da coluna e a separação excelente comparadas a outros tipos de coluna.

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Last Updated: Feb 1, 2019

Michael Greenwood

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Michael Greenwood

Michael graduated from Manchester Metropolitan University with a B.Sc. in Chemistry in 2014, where he majored in organic, inorganic, physical and analytical chemistry. He is currently completing a Ph.D. on the design and production of gold nanoparticles able to act as multimodal anticancer agents, being both drug delivery platforms and radiation dose enhancers.

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