Choix de medias de chromatographie

La chromatographie est une technique qui est employée pour la séparation des mélanges. Le nom combine le chroma grec de mot, ou la « couleur, » avec le graphein, « pour écrire. » La technique a été inventée en 1900 par Mikhail Tsvet, qui l'a employée « pour écrire les couleurs » des pigments de centrale, comme des carotènes de chlorophylle et des xanthophylles. Il a fait ceci en dissolvant les mélanges de centrale dans un liquide, ou la phase mobile, et lui permettre de traverser un matériau solide appelé une phase stationnaire.

Les composantes du mélange à séparer traversent le matériau de phase stationnaire à différents régimes, qui produit des ondes ou des bandes. Initialement, ces bandes ont été trouvées par des différences visibles de couleur. Des méthodes de dépistage sont maintenant basées sur les propriétés chimiques et physiques des molécules étant séparées, y compris, notamment, la couleur, l'absorbance UV, la taille, la charge, et le hydrophobicity.

Dans des séparations chromatographiques modernes, la phase stationnaire vient sous forme de medias, préemballés dans un fléau de chromatographie ou ajoutés par l'usager à l'appareillage de séparation. Le choix des medias dépend du type de molécule étant séparée, les moyens de la séparation, le but et l'écaille de la séparation, ainsi que la pureté désirée de l'échantillon séparé.

Généralement, la matière employée dans des medias de chromatographie est une particule ou une résine bourrée en fléau. L'échantillon est chargé dans le haut du fléau et est affleuré avec le liquide de phase mobile, densité ou sous pression. La chromatographie peut être effectuée sur une petite échelle pour des buts analytiques ou sur une support-à-grande échelle pour des buts de préparation et d'industriel.

Chromatographie d'échange ionique

Une des méthodes les plus populaires pour séparer des protéines est la chromatographie d'échange ionique. Elle sépare des protéines dans un échantillon basé sur la charge. Si d'a des molécules chargées négativement - de la résine chargée est employée pour capter franchement -, la méthode désigné sous le nom de la chromatographie d'échange cationique.

L'opposé, dans lequel la résine franchement - chargé et la molécule-cible est négativement - est chargée, est chromatographie appelée d'échange anionique. Une résine d'échange ionique est effectuée utilisant franchement ou négativement - les groupes fonctionnels chargés sur une modification solide comme la cellulose, l'agarose ou le polyacrylamide. Un échantillon de protéine est chargé sur le fléau dans un tampon d'à faible teneur en sel et puis affleuré par le fléau avec un gradient de concentration en sel ou le changement du pH.

Chromatographie d'exclusion de taille

Une propriété physique simple et étonnant efficace qui peut être employée pour des séparations chromatographiques est taille. Dans la taille la chromatographie d'exclusion (SEC), l'échantillon est filtrée à l'aide d'un gel fait de talons sphériques avec les pores particuliers particulier.

Ces pores comprennent ou excluent des protéines traversant dans la phase mobile. Cette méthode est utilisée généralement pour la séparation des protéines. Les molécules trop grandes pour entrer dans les pores traverseront rapidement, et des molécules qui entrent dans les pores seront ralenties et réussir par le fléau plus lentement. Sec est employée souvent comme première étape dans des purifications de protéine, comme avant une séparation d'échange ionique et pour dessaler un échantillon ou mélanger des tampons.

Chromatographie d'affinité

La chromatographie d'affinité est basée sur des interactions obligatoires entre une protéine et un ligand immobilisés à une résine. Ce des interactions grippantes sont hautement sélecteurs. Une séparation d'affinité est une séparation très précise et captera presque toujours seulement une protéine dans un mélange.

La chromatographie d'affinité peut être employée comme méthode en une étape de purification, dans certaines circonstances, réalisant une purification de plus grand que 1000 fois d'une protéine spécifique. Le matériau de résine pour un fléau d'affinité peut être solide ou un matériau poreux de gel. Un large éventail de matériaux ont été employés comme matériau de modification solide pour la chromatographie d'affinité, y compris l'agarose, la cellulose, le dextrane, le polyacrylamide, et beaucoup plus.

Les modifications poreuses de gel pour des fléaux d'affinité sont particulièrement attrayantes, parce que le format de micro-talon leur en permet d'être dispensé comme boue d'émoulage mouillée et d'être bourrée en fléaux de la taille. Les medias d'affinité pour gripper les classes générales des protéines ou les protéines avec les balises courantes de fusion est procurable commercialement. Des ligands plus spécialisés peuvent être accouplés aux produits de modification activés disponibles dans le commerce d'affinité.

Tandis que l'échange ionique, classent l'exclusion et des medias de chromatographie d'affinité sont certaines des options les plus populaires et les plus utilisées généralement, il y a des douzaines d'autres méthodes. Celles-ci comprennent la chromatographie hydrophobe d'interaction, la chromatographie à phase renversée, la chromatographie bidimensionnelle et beaucoup d'autres qui sont employées pour explorer et réaliser la séparation parfaite.

Sources

  1. Chlorophylle de système d'appoint à la décision d'über de Mikhail Tswett (1906) « Physikalisch-Chemische Studien. Meurent l'adsorption. » (Études physico-chimiques de chlorophylle. Le der Deutschen de Berichte d'adsorption.) botanischen le Gesellschaft, vol. 24, Pp. 316-326.
  2. Bouts de banc : Bouts sur sélecter une résine de chromatographie liquide, www.biocompare.com/.../
  3. Chromatographie d'échange ionique, http://www.proteinchemist.com/tutorial/iec.html
  4. Synthèse de la purification d'affinité, www.thermofisher.com/.../overview-affinity-purification.html

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Last Updated: Feb 26, 2019

Dr. Catherine Shaffer

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Dr. Catherine Shaffer

Catherine Shaffer is a freelance science and health writer from Michigan. She has written for a wide variety of trade and consumer publications on life sciences topics, particularly in the area of drug discovery and development. She holds a Ph.D. in Biological Chemistry and began her career as a laboratory researcher before transitioning to science writing. She also writes and publishes fiction, and in her free time enjoys yoga, biking, and taking care of her pets.

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