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Problemi comuni nella coltura cellulare

La coltura cellulare è il trattamento di isolazione delle celle da un organismo e di crescente in un ambiente scientifico controllato. La contaminazione è un problema comune nella coltura cellulare e gli agenti inquinanti comprendono il micoplasma, il lievito, i batteri ed i prodotti chimici.

Da Anamaria MejiaCredito di immagine: Anamaria Mejia/Shutterstock

Origini di coltura cellulare

La pratica di coltura cellulare ha cominciato come cultura del tessuto durante l'anno 1907 in cui Ross Harrison, un biologo americano e pioniere nella biologia sperimentale, ha sviluppato “la tecnica d'attaccatura di goccia„.

Harrison ha eliminato le fibre nervose di una rana e le ha collocate in un siero contenente medio del sale. Ha osservato che le celle potevano svilupparsi facilmente nel nuovo ambiente. Ciò era l'inizio della coltura cellulare animale. Dalla scoperta di Harrison, ci sono stati parecchi avanzamenti nelle tecniche della coltura cellulare.

Tipi di colture cellulari

Le tecniche differenti della coltura cellulare sono cultura di organo, coltura cellulare aderente, cultura di sospensione, cultura primaria e linee cellulari continue.

Cultura di organo

Nella cultura di organo, l'intero organo explanted, conservante le interazioni della cella-cella. La cultura di organo è difficile da usare per la determinazione quantitativa, poichè la variazione fra i batch sperimentali differenti è più alta.

Coltura cellulare aderente

La coltura cellulare aderente comprende la crescita delle celle come strati monomolecolari aderenti. Le celle dipendono dal substrato (livello basale) per proliferazione, quindi l'arresto aderente degli strati monomolecolari dividentesi una volta che due celle entrate in contattano a vicenda.

Cultura di sospensione

In una cultura di sospensione, l'obbligazione fra le celle o fra le celle ed il substrato è suddivisa facendo uso degli enzimi proteolitici per più ulteriormente raccogliere.

Cultura primaria

Le culture primarie comprendono l'isolamento delle celle direttamente dall'animale.

Queste celle infine muoiono e un nuovo tessuto deve essere ottenuto ancora una volta dall'animale per la preparazione della coltura nuova. Ciò è perché le celle che si dividono nella cultura finalmente cesseranno di dividersi sopra la subcoltura ripetuta, riflettendo il trattamento della senescenza che si presenta solitamente a tutte le celle in situ.

Linee cellulari continue

Per ricambiare l'emissione della senescenza, le linee cellulari continue sono state sviluppate. Queste linee cellulari solitamente sono ottenute coltivando le celle del tumore e non richiedono alcun substrato per la loro crescita.

Problemi comuni nella coltura cellulare

Ci sono molte pratiche per la manipolazione le linee cellulari, i media della coltura cellulare e dei reagenti per evitare la contaminazione trasversale. Alcuni dei problemi comuni affrontati sono indicati qui sotto:

Contaminazione dai batteri, dai funghi e dal lievito

Questo tipo di contaminazione può accadere tramite la strumentazione di laboratorio, reagenti e perfino tramite i capelli, le mani, il respiro, o l'abbigliamento dell'operatore. La precipitazione radioattiva polverizzata o la precipitazione radioattiva dell'aerosol durante la tutta la fase della coltura piombo a contaminazione biologica.

Inoltre, gli impianti del laboratorio quali i gabinetti di corrente d'aria laminare, anidride carbonica hanno umidificato le incubatrici ed i bagnomaria sono sorgenti per contaminazione biologica oltre a dovuto causato contaminazione spolverare, ad aerosol, o a presenza di crepe. La boccetta con i cappucci sciolti e le lastre grosse di cultura impropriamente sigillate aprono la strada affinchè gli agenti inquinanti striscino, a nuotare e svilupparsi nelle culture.

Contaminazione del micoplasma

Conosciuto come “il crabgrass„ delle colture cellulari, i mycoplasmas hanno la capacità di alterare la funzione delle cellule della cultura ospite che determina gli effetti citopatici.

Contaminazione chimica

Le costituzioni sbagliate dei reagenti o la qualità inferiore alla media dell'acqua, dei sieri, o dei contenitori utilizzati per preparare i reagenti sono alcune ragioni per contaminazione chimica di una coltura cellulare.

Le endotossine, il sottoprodotto dei batteri gram-negativi, a volte sono trovate in sieri ed altri additivi che pregiudicano la crescita di una cultura.

Impedire contaminazione della cultura

Le seguenti misure possono essere catturate per diminuire il rischio di contaminazione della cultura:

  • Uso di buone tecniche asettiche;
  • Prevenendo gli infortuni, quali i versamenti nell'area di lavoro;
  • Tenendo il laboratorio e le aree di lavoro circostanti puliscono;
  • Uso giudizioso degli antibiotici impedire la formazione di sforzi resistenti agli antibiotici;
  • Assegni sistematici di qualità per contaminazione; e
  • L'uso strategico delle repository congelate delle cellule è alcuni dei punti per gestire la contaminazione.
Aseptic Techniques: Cell Culture Basics

Il collocamento delle misure adeguate per diminuire la contaminazione della cultura può salvare l'industria della ricerca dalle perdite monetarie enormi come pure impedire i rischi per la salute nel personale del laboratorio che è esposto ordinariamente ai virus potenti (HIV, epatite B, Epstein Barr, herpes), ai batteri e ad altri microbi.

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Last Updated: Oct 3, 2018

Deepthi Sathyajith

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Deepthi Sathyajith

Deepthi spent much of her early career working as a post-doctoral researcher in the field of pharmacognosy. She began her career in pharmacovigilance, where she worked on many global projects with some of the world's leading pharmaceutical companies. Deepthi is now a consultant scientific writer for a large pharmaceutical company and occasionally works with News-Medical, applying her expertise to a wide range of life sciences subjects.

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