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Problemas comuns na cultura celular

A cultura celular é o processo de isolar pilhas de um organismo e de crescê-las em um ambiente scientifically controlado. A contaminação é um problema comum na cultura celular, e os contaminadores incluem o mycoplasma, o fermento, as bactérias, e os produtos químicos.

Por Anamaria MejiaCrédito de imagem: Anamaria Mejia/Shutterstock

Origens da cultura celular

A prática da cultura celular começou como a cultura do tecido no ano 1907 em que Ross Harrison, um biólogo americano e pioneiro na biologia experimental, desenvolveu “a técnica de suspensão da gota”.

Harrison removeu as fibras de nervo de uma rã e colocou-as em um soro de contenção médio de sal. Observou que as pilhas podiam crescer facilmente no ambiente novo. Este era o começo da cultura celular animal. Desde a descoberta de Harrison, houve diversos avanços em técnicas da cultura celular.

Tipos de cultura celular

As técnicas diferentes da cultura celular são cultura de órgão, cultura celular aderente, cultura de suspensão, cultura preliminar, e linha celular contínuas.

Cultura de órgão

Na cultura de órgão, o órgão inteiro explanted, preservando interacções da pilha-pilha. A cultura de órgão é difícil de usar-se para a determinação quantitativa, porque a variação entre grupos experimentais diferentes é mais alta.

Cultura celular aderente

A cultura celular aderente envolve o crescimento das pilhas como monolayers aderentes. As pilhas são dependentes do substrato (camada básica) para a proliferação, daqui a parada aderente dos monolayers dividindo-se uma vez que duas pilhas entradas contactam um com o otro.

Cultura de suspensão

Em uma cultura de suspensão, a ligação entre as pilhas ou entre as pilhas e o substrato é dividida usando enzimas proteolytic para mais colher.

Cultura preliminar

As culturas preliminares envolvem o isolamento das pilhas directamente do animal.

Estas pilhas morrem finalmente e um tecido novo precisa de ser obtido mais uma vez do animal para preparar uma cultura nova. Isto é porque as pilhas que se dividem na cultura cessarão eventualmente de se dividir em cima de subculturing repetido, refletindo o processo de senescence que ocorre geralmente a todas as pilhas in situ.

Linha celular contínuas

Para opr a introdução do senescence, as linha celular contínuas foram desenvolvidas. Estas linha celular geralmente são obtidas cultivando pilhas do tumor e não exigem nenhum substrato para seu crescimento.

Problemas comuns na cultura celular

Há muitas práticas para segurar linha celular, media de cultura celular e reagentes para evitar a contaminação colateral. Algumas das edições comuns enfrentadas são indicadas abaixo:

Contaminação pelas bactérias, pelos fungos, e pelo fermento

Este tipo de contaminação pode acontecer através do equipamento de laboratório, reagentes, e mesmo através do cabelo, das mãos, da respiração, ou da roupa do operador. A precipitação ínfima ou a precipitação do aerossol durante toda a fase do cultivo conduzirão à contaminação biológica.

Além, as facilidades do laboratório tais como gabinetes do fluxo de ar laminar, dióxido de carbono humedeceram incubadoras, e os banhos da água são fontes para a contaminação biológica independentemente de devido causado contaminação espanar, dos aerossóis, ou da presença de fendas. A garrafa com tampões fracos e as placas de cultura impropriamente seladas pavimentam a maneira para que os contaminadores rastejem, nadem, e cresçam nas culturas.

Contaminação do Mycoplasma

Sabido como a “digitária” das culturas celulares, os mycoplasmas têm a capacidade para alterar a função da pilha da cultura do anfitrião que traz sobre efeitos cytopathic.

Contaminação química

As constituições erradas dos reagentes ou a qualidade de qualidade inferior da água, dos soros, ou dos recipientes usados para fazer os reagentes são algumas razões para a contaminação química de uma cultura celular.

As endotoxinas, o byproduct das bactérias relvado-negativas, são encontradas às vezes nos soros e nos outros aditivos que afectam o crescimento de uma cultura.

Impedindo a contaminação da cultura

As seguintes etapas podem ser tomadas para reduzir o risco de contaminação da cultura:

  • Uso de boas técnicas assépticas;
  • Reduzindo acidentes, tais como derramamentos na área de trabalho;
  • Mantendo o laboratório e o trabalho circunvizinho as áreas limpam;
  • Uso judicioso dos antibióticos impedir a formação de tensões resistentes aos antibióticos;
  • Verificações rotineiras da qualidade para a contaminação; e
  • O uso estratégico de repositórios congelados da pilha é algumas das etapas para controlar a contaminação.
Aseptic Techniques: Cell Culture Basics

Colocar medidas adequadas reduzir a contaminação da cultura pode salvar a indústria da pesquisa das perdas monetárias enormes assim como impedir riscos sanitários nos pessoais do laboratório que são expor rotineiramente aos vírus poderosos (VIH, hepatite B, Epstein Barr, herpes), às bactérias e aos outros micróbios.

Fontes:

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Last Updated: Oct 3, 2018

Deepthi Sathyajith

Written by

Deepthi Sathyajith

Deepthi spent much of her early career working as a post-doctoral researcher in the field of pharmacognosy. She began her career in pharmacovigilance, where she worked on many global projects with some of the world's leading pharmaceutical companies. Deepthi is now a consultant scientific writer for a large pharmaceutical company and occasionally works with News-Medical, applying her expertise to a wide range of life sciences subjects.

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