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Trouver l'aneuploidie utilisant la cytométrie de flux

L'aneuploidie est définie comme aberration chromosomique comportant un ajout ou l'omission des chromosomes comparés au nombre « normal » de 46 chromosomes. La cytométrie de flux est un outil utile pour trouver anueploidy.  

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Pourquoi cytométrie de flux ?

Traditionnellement, l'aneuploidie a été diagnostiquée en comptant les chromosomes de métaphase sous le microscope. Cependant, dans de nombreux cas, et principalement en raison du nombre élevé ou plus peu élevé des chromosomes, il était difficile d'obtenir un compte précis. De plus, la méthode concerne beaucoup de temps et la manipulation des acides intenses, qui le rend inapproprié pour l'usage de grande puissance.

La cytométrie de flux surpasse les désavantages mentionnés ci-dessus puisqu'elle mesure la quantité d'ADN plutôt le compte du nombre de chromosomes. En outre, en raison de la nature indépendante de la méthode, il n'y a aucune interaction avec les solvants risqués.

La cytométrie de flux est une technique précise et fiable

L'exactitude de la cytométrie de flux est sujette à des conditions suivantes : à basse altitude du coefficient de variation des crêtes d'ADN, d'une proportion égale de cellules dans chaque crête, et d'une petite différence dans l'ADN de l'échantillon et de la référence interne.

Par exemple, si la crête d'ADN dans la référence interne fait une pointe à 100, la crête de l'ADN des échantillons devrait se trouver de l'ordre +/- de 50 de la crête de référence. Les moyennes positions devraient être définies pour des crêtes de référence et témoin. Le rapport normal est continuel et se rapporte au rapport de la crête témoin et de la crête de référence.

Cytométrie de flux pour trouver l'aneuploidie dans des échantillons de plante

Dans des échantillons de plante, la côte d'une lame ouverte est coupée utilisant un rasoir dans la boîte de Pétri qui se compose de l'acide citrique et du Tween 20. L'échantillon peut être filtré utilisant une maille en nylon. La norme interne, telle que des noyaux (RBC) d'hématie et la souillure nucléaire sont ajoutées au tampon.

Le teneur d'ADN est déterminé en comparant les noyaux de la référence interne et les noyaux témoin, et environ 5000-10000 noyaux s'analysent pour obtenir une moyenne. Cependant, dans certains cas, tous les chromosomes peuvent ne pas avoir le même numéro, qui peut potentiellement mener aux complications dans l'analyse de cytométrie de flux.

Cytométrie de flux pour trouver l'aneuploidie dans les cancers

La cytométrie de flux a été également exécutée pour trouver des aberrations dans le numéro de chromosome dans le carcinome humain de poumon de petite cellule. Dans ce cas, deux ou trois parties de tissu qui étaient approximativement 50 micromètres larges dewaxed en xylène, ont été soumises à la réhydratation en éthanol, et puis lavées en eau distillée.

Les tissus ont été traités avec du citrate et la pepsine pour obtenir les suspensions unicellulaires. Ceux-ci ont été alors filtrés dans la maille en nylon et lavés. Des noyaux dissociés ont été souillés pour des noyaux utilisant l'iodure de propidium. Ces noyaux ont été alors soumis à la cytométrie de flux et analysés utilisant le logiciel de ModFit.

Analyser les caractéristiques

Dans les cas où le coefficient de variation dépasse 10%, les histogrammes sont jetés et pas employés pour l'analyse finale. L'échantillon est considéré diploïde dans les cas où il y a une crête unique et indépendante dans la phase G0/G1. Les histogrammes qui étaient tétraploïdes ou le multiploid sont classifiés comme aneuploïdes.

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Last Updated: Mar 28, 2019

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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