ACP de Digitals et ACP traditionnel : Quelle est la différence ?

ACP de Digitals - Synthèse

D'abord décrit pendant les années 1990, l'ACP digital est une approche nouvelle à l'ACP qui permet le dépistage et la quantification précis de la quantité d'acides nucléiques formés pendant l'ACP.

Il est différent de l'ACP conventionnel car il compte les molécules-cible directement dans un format numérique sans compter sur des contrôles endogènes ou des normes. Ainsi, utilisation digitale de découvertes d'ACP dans beaucoup d'applications ayant limité la disponibilité d'échantillon et exigeant la sensibilité élevée.

Principes d'ACP de Digitals

La réaction d'ACP de Digitals est exécutée en diluant le mélange témoin et d'analyse dans plusieurs milliers de petits compartiments. Le concept de base derrière cette dilution est que la concentration en molécule-cible dans chaque réaction peut être en toute sécurité assumée car zéro ou un.

Au point final, la mise en chauffage est effectuée. Les compartiments qui contiennent la molécule-cible montreront la fluorescence tandis que celle qui ne contiennent pas la fluorescence de mouvement propre d'exposition de molécule-cible seulement. Des réactions à la molécule-cible sont comptées en tant que 1 ou des réactions ACP-positives et les réactions sans molécule-cible sont comptées en tant que 0 ou réactions ACP-négatives.

Après compte de l'ensemble complet de réactions, le nombre de molécules-cible en volume entier de réaction sera égal au nombre de réactions positives comptées. Par conséquent la concentration d'objectif absolue peut être prévue en divisant tout le nombre de molécules-cible par tout le volume.

Pour la meilleure exactitude, les méthodes de dPCR devraient avoir des mécanismes aux erreurs de contrôle en volumes mesurés et s'assurer là n'est pas plus d'une molécule-cible en chaque compartiment. Des statistiques de Poisson peuvent être employées pour déterminer les possibilités de plus qu'une molécule monocible étant présente en un compartiment. Plus la dilution et le nombre de répliques sont élevée, plus la sensibilité et exactitude de l'analyse de dPCR est élevée.

Ainsi, l'ACP digital est un troisième génération de l'ACP qui utilise une combinaison de la dilution d'échantillon, de l'ACP de point final, et des statistiques de Poisson pour réaliser une quantitation absolue de l'acide nucléique. Les constructions avancées de cette technique sur l'ACP traditionnel et est idéale pour des applications exigeant le dépistage des quantités minuscules d'échantillon d'acide nucléique telles que l'analyse de variation de numéro de copie, l'analyse de l'expression des gènes rare, l'analyse unicellulaire, et le dépistage rare de séquence.

Avantages d'ACP de Digitals

Les avantages clé de l'ACP digital sont cotés ci-dessous :

  • Aucune dépendance sur des normes ou des références
  • Dépistage linéaire des modifications de minute-pli
  • Capacité pour analyser des événements rares et des mélanges complexes
  • Hautement inhibiteur-tolérant
  • Allows a augmenté la précision en augmentant des compartiments de dilution et d'objectif

Différences entre l'ACP traditionnel et l'ACP de Digitals

Les différences principales entre l'ACP traditionnel et l'ACP digital sont tabulées ci-dessous :

ACP traditionnel ACP de Digitals

L'ACP traditionnel estime la quantité de produit amplifié d'ACP à la fin des multiples cycles d'ACP.

L'ACP de Digitals analyse le chiffre des molécules-cible directement en comptant la fluorescence positive en compartiments.

L'ACP traditionnel est semi-quantitatif au mieux. La concentration des acides nucléiques peut être déterminée jusqu'à un degré en comparant l'intensité de bande amplifiée sur un gel d'électrophorèse à une norme connue.

L'ACP de Digitals permet la quantitation absolue de la molécule-cible utilisant un seul mélange de dilution d'échantillon et d'algorithme statistique de Poisson.

L'utilisation de l'ACP traditionnel est limitée à l'amplification des acides nucléiques pour l'ordonnancement, le clonage, et le génotypage

L'ACP de Digitals est hautement sensible et précis et peut être employé effectivement dans la mesure absolue des acides nucléiques, du dépistage rare de gène, et de la quantification absolue de l'expression du gène

L'ACP traditionnel a la sensibilité inférieure et l'exactitude faible

Dans l'ACP digital, désiré à niveau de l'exactitude peut être réalisé en augmentant le nombre de répliques

L'ACP traditionnel est un procédé non automatisé

L'ACP de Digitals peut être facilement automatisé pour une plus haute précision

Seulement la discrimination basée sur taille est possible dans l'ACP traditionnel

L'ACP de Digitals peut être employé pour l'analyse précise des mélanges complexes

Aucune expression numérique des résultats et du traitement goujon-ACP n'est exigée dans l'ACP traditionnel

L'ACP de Digitals fournit des résultats conviviaux dans le format numérique

Références

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Last Updated: Feb 26, 2019

Susha Cheriyedath

Written by

Susha Cheriyedath

Susha has a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Chemistry and Master of Science (M.Sc) degree in Biochemistry from the University of Calicut, India. She always had a keen interest in medical and health science. As part of her masters degree, she specialized in Biochemistry, with an emphasis on Microbiology, Physiology, Biotechnology, and Nutrition. In her spare time, she loves to cook up a storm in the kitchen with her super-messy baking experiments.

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