PCR di Digital e PCR tradizionale: Che cosa è la differenza?

PCR di Digital - Generalità

In primo luogo descritto negli anni 90, la PCR digitale è un approccio novello alla PCR che permette la rilevazione e la quantificazione precise della quantità di acidi nucleici formati durante la PCR.

È differente dalla PCR convenzionale poichè conta le molecole dell'obiettivo direttamente in un formato digitale senza contare sui comandi o sugli standard endogeni. Quindi, uso digitale dei ritrovamenti di PCR in molte applicazioni che limitano disponibilità del campione e richiedendo alta sensibilità.

Principi di PCR di Digital

La reazione di PCR di Digital è eseguita diluendo la miscela di analisi e del campione in parecchie migliaia di piccoli compartimenti. Il concetto di base dietro questa diluizione è che la concentrazione nella molecola dell'obiettivo in ogni reazione può essere presupposta sicuro poichè zero o uno.

Al punto finale, il riciclaggio termico è effettuato. I compartimenti che contengono la molecola dell'obiettivo mostreranno la fluorescenza mentre quelle che non contengano la fluorescenza di sfondo di manifestazione della molecola dell'obiettivo soltanto. Le reazioni con la molecola dell'obiettivo sono contate come 1 o le reazioni PCR-positive e le reazioni senza la molecola dell'obiettivo sono contate come 0 o reazioni PCR-negative.

Dopo il conteggio dell'insieme completo delle reazioni, il numero delle molecole dell'obiettivo nell'intero volume della reazione sarà uguale al numero delle reazioni positive contate. Di conseguenza la concentrazione di obiettivo assoluta può essere calcolata dividendo il numero totale delle molecole dell'obiettivo dal volume totale.

Per l'accuratezza migliore, i metodi del dPCR dovrebbero avere meccanismi agli errori di controllo nei volumi misurati ed assicurarsi là non è più di una molecola dell'obiettivo in ogni compartimento. Le statistiche di Poisson possono essere usate per determinare le probabilità di più di singola molecola dell'obiettivo che è presente in un compartimento. Più alta la diluizione ed il numero delle repliche, più alta la sensibilità ed accuratezza dell'analisi del dPCR.

Quindi, la PCR digitale è una terza generazione della PCR che impiega una combinazione di diluizione del campione, di PCR di punto finale e di statistiche di Poisson per raggiungere una quantificazione assoluta dell'acido nucleico. Le configurazioni avanzate di questa tecnica sopra la PCR tradizionale ed è ideali per le applicazioni che richiedono la rilevazione delle quantità minuscole di campione dell'acido nucleico quali l'analisi della variazione di numero di copia, l'analisi rara di espressione genica, l'analisi unicellulare e la rilevazione rara di sequenza.

Vantaggi della PCR di Digital

I vantaggi chiave della PCR digitale sono elencati qui sotto:

  • Nessuna dipendenza dagli standard o dai riferimenti
  • Rilevazione lineare dei cambiamenti del minuto-popolare
  • Capacità per analizzare gli eventi rari e le miscele complesse
  • Altamente inibitore-tollerante
  • Allows ha aumentato la precisione aumentando i compartimenti dell'obiettivo e di diluizione

Differenze fra la PCR tradizionale e la PCR di Digital

Le differenze chiave fra la PCR tradizionale e la PCR digitale sono tabulate qui sotto:

PCR tradizionale PCR di Digital

La PCR tradizionale stima la quantità di prodotto ampliato di PCR all'estremità dei parecchi cicli di PCR.

La PCR di Digital misura il numero delle molecole dell'obiettivo direttamente contando la fluorescenza positiva in compartimenti.

La PCR tradizionale è semiquantitativa nel migliore dei casi. La concentrazione di acidi nucleici può essere determinata in misura confrontando l'intensità di banda ampliata su un gel dell'elettroforesi ad uno standard conosciuto.

La PCR di Digital permette la quantificazione assoluta della molecola dell'obiettivo facendo uso di una miscela unica di diluizione del campione e dell'algoritmo statistico di Poisson.

L'uso della PCR tradizionale è limitato all'amplificazione degli acidi nucleici per l'ordinamento, la clonazione e genotyping

La PCR di Digital è altamente sensibile ed accurata e può essere utilizzata efficacemente nella misura assoluta degli acidi nucleici, della rilevazione rara del gene e della quantificazione assoluta di espressione genica

La PCR tradizionale ha accuratezza bassa del povero e della sensibilità

Nella PCR digitale, desiderata a livello di accuratezza può essere raggiunto aumentando il numero delle repliche

La PCR tradizionale è un trattamento non automatizzato

La PCR di Digital può essere automatizzata facilmente per più alta precisione

Soltanto a distinzione basata a dimensione è possibile nella PCR tradizionale

La PCR di Digital può essere usata per l'analisi precisa delle miscele complesse

Nessun'espressione numerica dei risultati e del trattamento post-PCR è richiesta nella PCR tradizionale

La PCR di Digital fornisce i risultati facili da usare nel formato digitale

Riferimenti

Further Reading

Last Updated: Feb 26, 2019

Susha Cheriyedath

Written by

Susha Cheriyedath

Susha has a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Chemistry and Master of Science (M.Sc) degree in Biochemistry from the University of Calicut, India. She always had a keen interest in medical and health science. As part of her masters degree, she specialized in Biochemistry, with an emphasis on Microbiology, Physiology, Biotechnology, and Nutrition. In her spare time, she loves to cook up a storm in the kitchen with her super-messy baking experiments.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Cheriyedath, Susha. (2019, February 26). PCR di Digital e PCR tradizionale: Che cosa è la differenza?. News-Medical. Retrieved on October 15, 2019 from https://www.news-medical.net/life-sciences/Digital-PCR-and-Traditional-PCR-Whate28099s-the-Difference.aspx.

  • MLA

    Cheriyedath, Susha. "PCR di Digital e PCR tradizionale: Che cosa è la differenza?". News-Medical. 15 October 2019. <https://www.news-medical.net/life-sciences/Digital-PCR-and-Traditional-PCR-Whate28099s-the-Difference.aspx>.

  • Chicago

    Cheriyedath, Susha. "PCR di Digital e PCR tradizionale: Che cosa è la differenza?". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/Digital-PCR-and-Traditional-PCR-Whate28099s-the-Difference.aspx. (accessed October 15, 2019).

  • Harvard

    Cheriyedath, Susha. 2019. PCR di Digital e PCR tradizionale: Che cosa è la differenza?. News-Medical, viewed 15 October 2019, https://www.news-medical.net/life-sciences/Digital-PCR-and-Traditional-PCR-Whate28099s-the-Difference.aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News-Medical.Net.
Post a new comment
Post