Polimerización en cadena de Digitaces y polimerización en cadena tradicional: ¿Cuál es la diferencia?

Polimerización en cadena de Digitaces - Reseña

Primero descrito en los años 90, la polimerización en cadena digital es un nuevo enfoque a la polimerización en cadena que permite la detección y la cuantificación exactas de la cantidad de ácidos nucléicos formados durante la polimerización en cadena.

Es diferente de la polimerización en cadena convencional pues cuenta las moléculas del objetivo directamente en un formato digital sin la confianza en mandos o patrones endógenos. Así, uso digital de los hallazgos de la polimerización en cadena en muchos usos que limitan disponibilidad de la muestra y requiriendo alta sensibilidad.

Principios de la polimerización en cadena de Digitaces

La reacción de la polimerización en cadena de Digitaces es realizada diluyendo la mezcla de la muestra y del análisis en varios millares de pequeñas divisiones. El concepto básico detrás de esta dilución es que la concentración de la molécula del objetivo en cada reacción se puede asumir con seguridad pues cero o uno.

En la punto final, se realiza el ciclaje térmico. Las divisiones que contienen la molécula del objetivo mostrarán fluorescencia mientras que las que no contienen la fluorescencia del fondo de la demostración de la molécula del objetivo solamente. Las reacciones con la molécula del objetivo se cuentan como 1 o las reacciones Polimerización en cadena-positivas y las reacciones sin la molécula del objetivo se cuentan como 0 o reacciones Polimerización en cadena-negativas.

Después de contar el equipo completo de reacciones, el número de moléculas del objetivo en el volumen entero de la reacción será igual al número de reacciones positivas contadas. Por lo tanto la concentración de objetivo absoluta puede ser calculada dividiendo el número total de moléculas del objetivo por el volumen total.

Para la exactitud mejor, los métodos del dPCR deben tener mecanismos a los desvíos de mando en volúmenes medidos y asegurarse de allí no es más de una molécula del objetivo en cada división. Las estadísticas de Poisson se pueden utilizar para determinar las ocasiones más que una única molécula del objetivo que está presente en una división. Cuanto más alta es la dilución y el número de réplicas, más alta es la sensibilidad y exactitud del análisis del dPCR.

Así, la polimerización en cadena digital es una tercera generación de polimerización en cadena que emplee una combinación de la dilución de la muestra, de la polimerización en cadena de la punto final, y de las estadísticas de Poisson para lograr una cuantificación absoluta del ácido nucléico. Las estructuras avanzadas de esta técnica sobre la polimerización en cadena tradicional y son ideales para los usos que requieren la detección de cantidades minúsculas de la muestra del ácido nucléico tales como análisis de la variación del número de copia, análisis raro de la expresión génica, análisis unicelular, y detección rara de la serie.

Ventajas de la polimerización en cadena de Digitaces

Las ventajas dominantes de la polimerización en cadena digital son mencionadas abajo:

  • Ninguna dependencia en patrones o referencias
  • Detección lineal de los cambios del minuto-doblez
  • Capacidad para analizar casos excepcionales y mezclas complejas
  • Altamente inhibidor-tolerante
  • Allows aumentó la precisión aumentando las divisiones de la dilución y del objetivo

Diferencias entre la polimerización en cadena tradicional y la polimerización en cadena de Digitaces

Las diferencias claves entre la polimerización en cadena tradicional y la polimerización en cadena digital se tabulan abajo:

Polimerización en cadena tradicional Polimerización en cadena de Digitaces

La polimerización en cadena tradicional estima la cantidad de producto amplificado de la polimerización en cadena en el extremo de los varios ciclos de la polimerización en cadena.

La polimerización en cadena de Digitaces mide el número de moléculas del objetivo directamente contando fluorescencia positiva en divisiones.

La polimerización en cadena tradicional es semiquantitativa en el mejor de los casos. La concentración de ácidos nucléicos se puede determinar a un fragmento comparando la intensidad de banda amplificada en un gel de la electroforesis a un patrón sabido.

La polimerización en cadena de Digitaces permite la cuantificación absoluta de la molécula del objetivo usando una mezcla única de la dilución de la muestra y del algoritmo estadístico de Poisson.

El uso de la polimerización en cadena tradicional se limita a la amplificación de los ácidos nucléicos para ordenar, reproducirse, y genotyping

La polimerización en cadena de Digitaces es altamente sensible y exacta y se puede utilizar eficazmente en la medición absoluta de ácidos nucléicos, de la detección rara del gen, y de la cuantificación absoluta de la expresión génica

La polimerización en cadena tradicional tiene sensibilidad inferior y exactitud pobre

En la polimerización en cadena digital, deseada llano de exactitud puede ser logrado aumentando el número de réplicas

La polimerización en cadena tradicional es un proceso no automatizado

La polimerización en cadena de Digitaces se puede automatizar fácilmente para una precisión más alta

Solamente la discriminación talla-basada es posible en la polimerización en cadena tradicional

La polimerización en cadena de Digitaces se puede utilizar para el análisis exacto de mezclas complejas

No se requiere ninguna expresión numérica de resultados y del tramitación poste-POLIMERIZACIÓN EN CADENA en la polimerización en cadena tradicional

La polimerización en cadena de Digitaces ofrece resultados conviviales en formato digital

Referencias

[Lectura adicional: Reacción en cadena de polimerasa]

Last Updated: Feb 26, 2019

Susha Cheriyedath

Written by

Susha Cheriyedath

Susha has a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Chemistry and Master of Science (M.Sc) degree in Biochemistry from the University of Calicut, India. She always had a keen interest in medical and health science. As part of her masters degree, she specialized in Biochemistry, with an emphasis on Microbiology, Physiology, Biotechnology, and Nutrition. In her spare time, she loves to cook up a storm in the kitchen with her super-messy baking experiments.

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