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Immunohistochimie enzymatique (IHC)

L'immunohistochimie (IHC) est une technique qui permet à des chercheurs de concevoir la distribution spatiale des éléments cellulaires dans l'architecture de tissu. L'immunohistochimie enzymatique est l'une des méthodes de dépistage qui peuvent être employées en considérant l'IHC s'approchent.

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Développement d'immunohistochimie enzymatique

La technique enzymatique a été développée pendant les années 1960, approximativement 20 ans après que la méthode traditionnelle d'immunofluorescence avait été développée. Tandis que les méthodes d'immunofluorescence sont bien établies et peuvent être appliquées à plus d'un objectif, elles ont plusieurs inconvénients. Celles-ci comprennent ; la détérioration du signe fluorescent si enthousiaste et enregistré, autofluorescence du tissu environnant, et un numéro limité des combinaisons de couleurs.

Plutôt que se concentrant sur un fluorochrome (comme des méthodes de fluorescence faites), les travaux enzymatiques d'IHC par une enzyme marquent la réaction avec un substrat pour fabriquer un produit coloré, qui est alors trouvé et conçu.

Avantages d'IHC enzymatique

L'IHC enzymatique résout certains des problèmes présentés par IHC fluorescent parce que des échantillons souillés peuvent être enregistrés pour un plus long laps de temps et un autofluorescence réduit parce qu'un photomicroscope simple (plutôt qu'un microscope de fluorescence) peut être utilisé. Alternativement, un microscope électronique peut être utilisé.

D'autres avantages offerts par IHC enzymatique qui sont manqués par l'immunofluorescence IHC comprennent de grande précision en déterminant l'emplacement d'antigène devant améliorer le rapport de contraste, ainsi que la capacité de certains counterstains (tels que la hématoxyline) qui améliorent la visibilité d'architecture de tissu. Comme la fluorescence IHC, l'IHC enzymatique peut également être mis en application avec deux souillures ou plus à discerner plusieurs visent des éléments cellulaires.

L'IHC est en général très utilisé pour des buts diagnostiques, et l'IHC enzymatique n'est pas différent. L'IHC enzymatique (tel que des méthodes non étiquetées d'anticorps) a été également appliqué à l'immunohistochimie rénale, alors que l'IHC enzymatique direct a une utilisation importante pour les maladies lymphoproliferative, et pour l'étude du système endocrinien.

Comment l'immunohistochimie enzymatique fonctionne-t-elle ?

En un mot, l'IHC enzymatique concerne une réaction enzymatique entre l'anticorps et l'antigène. L'anticorps est marqué avec de l'enzyme avant de réagir avec de l'antigène. Une fois qu'ils ont réagi, l'antigène marqué produit un composé avec de l'anticorps, où l'enzyme catalyse une réaction pour produire un produit coloré insoluble d'un substrat. C'est ce produit de réaction qui s'analyse utilisant une lumière ou un microscope électronique.

Il y a des méthodes directes et indirectes pour effectuer l'IHC enzymatique. Dans la méthode directe, un anticorps marqué réagit directement avec de l'antigène d'objectif, et ce composé puis réagit avec un substrat (DAB) de diaminobenzidine pour produire la souillure colorée. La méthode directe a été couramment appliquée quand des anticorps monoclonaux sont examinés avant des processus de fabrication de large échelle.

La méthode indirecte a deux opérations indépendantes. Dans la première étape, un anticorps qui n'est pas marqué des grippages à l'antigène désiré. La deuxième opération concerne un anticorps secondaire qui est marqué avec de l'enzyme réagissant avec de l'anticorps primaire.

L'anticorps secondaire en question doit être augmenté contre l'immunoglobuline G (IgG), ou l'anticorps, en lequel l'anticorps primaire a été augmenté. Par exemple, avec de l'anticorps primaire étant le lapin IgG anti-humain, l'anticorps secondaire avec la marque enzymatique serait l'anti-lapin IgG de chèvre.

La méthode directe est plus simple et plus vite que la méthode indirecte. Tandis qu'elle a la spécificité élevée, sa sensibilité est inférieure au dépistage indirect, et a un numéro contraint des anticorps primaires qui peuvent être directement marqués. En outre, relativement une petite quantité d'anticorps secondaire marqué sont nécessaire pour la méthode indirecte comparée à la méthode directe.

Plus particulièrement, la méthode directe rendrait nécessaire le marquage de chaque anticorps primaire pour chaque antigène d'objectif, alors qu'avec la méthode indirecte, il est également possible de concevoir et appliquer plusieurs types de contrôles pour élargir le potentiel expérimental.

Il y a également des méthodes non étiquetées d'anticorps. La méthode de pont en enzymes est une telle méthode, où une marque d'enzymes grippe à un antigène d'objectif par l'intermédiaire de la réaction entre l'antigène et l'anticorps d'un pont en enzymes d'immunoglobuline.

La méthode (PAP) de peroxydase-anti-peroxydase exploite l'immunisation d'un anticorps avec une partie de peroxydase de raifort sauvage pour produire un anticorps de peroxydase d'anti-raifort sauvage, qui est consécutivement capable de gripper à une autre partie de peroxydase de raifort sauvage pour produire un polygone stable.

Last Updated: Jan 3, 2019

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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