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Immunohistochemistry enzimático (IHC)

O Immunohistochemistry (IHC) é uma técnica que permita que os pesquisadores visualizem a distribuição espacial de componentes celulares dentro da arquitetura do tecido. O immunohistochemistry enzimático é um dos métodos de detecção que podem ser usados ao considerar IHC se aproximam.

Baço manchado para CD79 (deixado) e CD3 (direito) para mostrar pilhas de B e de T - pelo vetpathologist

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Revelação do immunohistochemistry enzimático

A técnica enzimático foi desenvolvida nos anos 60, aproximadamente 20 anos depois que o método tradicional da imunofluorescência tinha sido desenvolvido. Quando os métodos da imunofluorescência forem bem conhecidos e puderem ser aplicados a mais de um alvo, têm diversos inconvenientes. Estes incluem; a deterioração do sinal fluorescente quando entusiasmado e armazenado, autofluorescence do tecido circunvizinho, e um número limitado de combinações de cor.

Um pouco do que focalizando em um fluorochrome (como métodos da fluorescência faça), os trabalhos enzimáticos de IHC por uma enzima etiquetam a reacção com uma carcaça para produzir um produto colorido, que então seja detectado e visualizado.

Benefícios de IHC enzimático

IHC enzimático resolve alguns dos problemas apresentados por IHC fluorescente porque as amostras manchadas podem ser armazenadas por um período de tempo mais longo e de autofluorescence reduzido porque um fotomicroscópio simples (um pouco do que um microscópio de fluorescência) pode ser usado. Alternativamente, um microscópio de elétron pode ser usado.

Uns benefícios mais adicionais oferecidos por IHC enzimáticos que são faltados pela imunofluorescência IHC incluem uma precisão mais alta ao determinar o lugar do antígeno devendo melhorar a relação do contraste, assim como a capacidade de determinados counterstains (tais como o hematoxylin) que aumentam a visibilidade da arquitetura do tecido. Como a fluorescência IHC, IHC enzimático pode igualmente ser executado com dois ou mais manchas a distinguir diversos visam componentes celulares.

IHC é geralmente amplamente utilizado para finalidades diagnósticas, e IHC enzimático é não diferente. IHC enzimático (tal como métodos sem etiqueta do anticorpo) foi aplicado igualmente ao immunohistochemistry renal, quando IHC enzimático directo tiver um uso importante para doenças lymphoproliferative, e para o estudo do sistema de glândula endócrina.

Como o immunohistochemistry enzimático trabalha?

Em resumo, IHC enzimático envolve uma reacção enzimático entre o anticorpo e o antígeno. O anticorpo é etiquetado com uma enzima antes da reacção com o antígeno. Uma vez que reagiram, o antígeno etiquetado cria um complexo com o anticorpo, onde a enzima catalisa uma reacção para criar um produto colorido insolúvel de uma carcaça. É este produto da reacção que é analisado usando uma luz ou um microscópio de elétron.

Há uns métodos directos e indirectos realizar IHC enzimático. No método directo, um anticorpo etiquetado reage directamente com o antígeno do alvo, e este complexo a seguir reage com uma carcaça (DAB) do diaminobenzidine para produzir a mancha colorida. O método directo foi aplicado geralmente quando os anticorpos monoclonais são seleccionados antes dos processos de manufactura da grande escala.

O método indirecto tem duas etapas separadas. Na primeira etapa, um anticorpo que não seja etiquetado ligamentos ao antígeno desejado. A segunda etapa envolve um anticorpo secundário que seja etiquetado com uma enzima que reage com o anticorpo preliminar.

O anticorpo secundário na pergunta tem que ser aumentado contra a imunoglobulina G (IgG), ou o anticorpo, em que o anticorpo preliminar foi aumentado. Por exemplo, com um anticorpo preliminar que é coelho IgG anti-humano, o anticorpo secundário com a etiqueta enzimático seria anti-coelho IgG da cabra.

O método directo é mais simples e mais rapidamente do que o método indirecto. Quando tiver a especificidade alta, sua sensibilidade é mais baixa do que a detecção indirecta, e tem um número forçado de anticorpos preliminares que podem directamente ser etiquetados. Além disso, relativamente uma pequena quantidade de anticorpo secundário etiquetado é necessário para o método indirecto comparado ao método directo.

Mais especificamente, o método directo necessitaria a rotulagem de cada anticorpo preliminar para cada antígeno do alvo, visto que com o método indirecto, é igualmente possível projectar e aplicar diversos tipos de controles alargar o potencial experimental.

Há igualmente uns métodos sem etiqueta do anticorpo. O método da ponte da enzima é um tal método, onde uma etiqueta da enzima liga a um antígeno do alvo através da reacção entre o antígeno e o anticorpo de uma ponte da enzima da imunoglobulina.

O método (PAP) da peroxidase-anti-peroxidase explora a imunização de um anticorpo com uma parte da peroxidase do armorácio para criar um anticorpo da peroxidase do anti-armorácio, que seja por sua vez capaz da ligação a uma outra parte da peroxidase do armorácio para produzir um polígono estável.

Fontes

Last Updated: Jan 3, 2019

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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