Immunohistochemistry enzimático (IHC)

El Immunohistochemistry (IHC) es una técnica que permite que los investigadores visualicen la distribución espacial de componentes celulares dentro de la configuración del tejido. El immunohistochemistry enzimático es uno de los métodos de detección que se pueden utilizar al considerar IHC se acercan.

Bazo manchado para CD79 (dejado) y CD3 (derecho) para mostrar las células de B y de T - por vetpathologist

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Revelado del immunohistochemistry enzimático

La técnica enzimática fue desarrollada en los años 60, aproximadamente 20 años después de que el método tradicional de la inmunofluorescencia había sido desarrollado. Mientras que los métodos de la inmunofluorescencia son establecidos y se pueden aplicar a más de un objetivo, tienen varias desventajas. Éstos incluyen; el deterioro de la señal fluorescente cuando es emocionado y salvado, autofluorescence del tejido circundante, y un número limitado de combinaciones de color.

Bastante que centrándose en un fluorocromo (como métodos de la fluorescencia haga), los trabajos enzimáticos de IHC por una enzima etiqueta reaccionar con un substrato para producir un producto coloreado, que después se descubre y se visualiza.

Ventajas de IHC enzimático

IHC enzimático resuelve algunos de los problemas presentados por IHC fluorescente porque las muestras manchadas se pueden salvar para un periodo de tiempo más largo y un autofluorescence reducido porque un microscopio liviano simple (bastante que un microscopio de fluorescencia) puede ser utilizado. Alternativamente, un microscopio electrónico puede ser utilizado.

Otras ventajas ofrecidas por IHC enzimáticos que sean faltados por la inmunofluorescencia IHC incluyen una exactitud más alta al determinar la situación del antígeno debido a un mejor coeficiente de contraste, así como la capacidad de ciertos counterstains (tales como hematoxylin) que aumenten visibilidad de la configuración del tejido. Como la fluorescencia IHC, IHC enzimático se puede también ejecutar con dos o más manchas de óxido a distinguir varios apuntan componentes celulares.

IHC en general es ampliamente utilizado para los propósitos diagnósticos, e IHC enzimático es no diferente. IHC enzimático (tal como métodos sin etiqueta del anticuerpo) también se ha solicitado al immunohistochemistry renal, mientras que IHC enzimático directo tiene un uso importante para las enfermedades lymphoproliferative, y el estudio del sistema endocrino.

¿Cómo el immunohistochemistry enzimático trabaja?

En pocas palabras, IHC enzimático implica una reacción enzimática entre el anticuerpo y el antígeno. El anticuerpo etiqueta con una enzima antes de reaccionar con el antígeno. Una vez que han reaccionado, el antígeno etiqueta crea un complejo con el anticuerpo, en donde la enzima cataliza una reacción para crear un producto coloreado insoluble de un substrato. Es este producto de la reacción que se analiza usando una luz o un microscopio electrónico.

Hay métodos directos e indirectos realizar IHC enzimático. En el método directo, un anticuerpo etiqueta reacciona directamente con el antígeno del objetivo, y este complejo después reacciona con un substrato (DAB) de la diaminobencidina para producir la mancha de óxido coloreada. El método directo se ha aplicado común cuando los anticuerpos monoclonales se revisan antes de procesos de fabricación del gran escala.

El método indirecto tiene dos pasos separados. En el primer paso, un anticuerpo que no etiqueta los lazos al antígeno deseado. El segundo paso implica un anticuerpo secundario que etiqueta con una enzima que reacciona con el anticuerpo primario.

El anticuerpo secundario en la pregunta tiene que ser aumentado contra la inmunoglobulina G (IgG), o el anticuerpo, en el cual el anticuerpo primario fue aumentado. Por ejemplo, con un anticuerpo primario siendo conejo IgG anti-humano, el anticuerpo secundario con la escritura de la etiqueta enzimática sería anti-conejo IgG de la cabra.

El método directo es más simple y más aprisa que el método indirecto. Mientras que tiene alta especificidad, su sensibilidad es más inferior que la detección indirecta, y tiene un número obligado de anticuerpos primarios que puedan etiqueta directamente. Además, una pequeña cantidad de anticuerpo secundario etiqueta es relativamente necesaria para el método indirecto comparado al método directo.

Más concretamente, el método directo necesitaría la etiqueta de cada anticuerpo primario para cada antígeno del objetivo, mientras que con el método indirecto, es también posible diseñar y aplicar varios tipos de mandos para ensanchar potencial experimental.

Hay también métodos sin etiqueta del anticuerpo. El método del puente de la enzima es un tal método, en donde una escritura de la etiqueta de la enzima ata a un antígeno del objetivo vía la reacción entre el antígeno y el anticuerpo de un puente de la enzima de la inmunoglobulina.

El método (PAP) de la peroxidasa-anti-peroxidasa explota la inmunización de un anticuerpo con una mitad de la peroxidasa del rábano picante para crear un anticuerpo de la peroxidasa del anti-rábano picante, que es a su vez capaz de atar a otra mitad de la peroxidasa del rábano picante para producir un polígono estable.

Fuentes

Last Updated: Jan 3, 2019

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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