FRETTE : Applications dans la biologie

Le transfert d'énergie de résonance de fluorescence (FRET) est un mécanisme du transfert d'énergie qui est largement utilisé dans des expériences biologiques telles que l'inspection de structure moléculaire. Il désigné souvent sous le nom « d'une grille de tabulation spectroscopique, » en raison de sa nature où la distance entre deux fluorophores est déterminée comme rapport d'intensités de fluorescence.

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La demande des molécules biologiques de FRETTE est examinée être inévitable, car ses mesures sont extrêmement sensibles aux distances qui sont à l'écaille de nanomètre. La mesure de FRETTE peut être exécutée avec seule la sensibilité unique de molécule, car elle est basée sur la technique de mesure fluorescente.

Applications de FRETTE dans le dépistage d'hybridation d'ADN

L'application de la FRETTE dans l'hybridation des sondes ADN améliore l'hybridation dans deux aspects.

  1. Signalez des sondes qui sont non réagies sont éteintes quand l'hybridation est exécutée a basé sur la FRETTE. Ceci évite le besoin de procédures de lavage et de support solide quand on observe la réaction d'hybridation en temps réel comme analyse homogène. L'avantage de ce type homogène d'analyse est sa moins de complexité et de vitesse, de sorte qu'il puisse être facilement adapté pour le rendement robotisé.
  2. In vivo des hybridations peuvent être directement exécutées en cellules sous tension en trouvant seulement les signes de sonde qui sont hybridés et dus à la plus grande vitesse de l'hybridation en solution. Des sondes d'hybridation de FRETTE de différents formats ont été développées.

Applications de FRETTE dans le dépistage de la mutation d'ADN

Des systèmes de transfert d'énergie peuvent être produits (des analyses de TDI) ou être perturbés (des analyses d'envahisseur) par les sondes de FRETTE d'oligonucléotide qui ont été particulièrement développées pour le dépistage de la mutation d'ADN. Les analyses d'envahisseur emploient les sondes dégradables comme 5' des analyses de nucléase ; d'ailleurs, ils utilisent deux sondes dégradables plutôt qu'une et une sonde non-dégradable fonctionnant en concert.

Des oligonucléotides linéaires et en forme d'épingle à cheveux sont utilisés en développant les structures branchées d'ADN et alors ils sont par conséquent détruits pendant la réaction. L'autre avantage de la méthode est qu'il a comme conséquence l'amplification efficace de signe et n'exige pas l'ACP pour trouver très peu de séquences d'objectif. L'avantage distinct des analyses de TDI est que des sondes de FRETTE sont produites dans le procédé de dépistage mais il exige l'amplification d'ACP.

Application de FRETTE dans des études de protéine

L'interaction de protéines extérieure de cellules joue un rôle indispensable dans le procédé de signalisation de transmembrane. Les résultats finaux significatifs des interactions de récepteur de ligand sont groupement des récepteurs et changent dans leur conformation.  La FRETTE est employée comme outil pour recenser la relation de distance et l'organisme supramoléculaire des molécules de surface de cellules. En dynamique de protéine, le repliement des protéines est le procédé le plus significatif qui est largement vérifié. le smFRET a été utilisé pour apprendre plus au sujet de se plier et dynamique de passage de dévoilement des molécules de deux états et plus grandes de multi-domaine.

Application de FRETTE dans le mappage biologique de membrane

L'interaction des protéines qui est présente dans la surface de la cellule est essentiellement importante pour le procédé de signalisation de transmembrane. Le groupement des récepteurs et les variations de leurs conformations sont les facteurs clé qui affectent le résultat final de l'interaction des récepteurs de ligand. L'organisme de cellules et la détermination supramoléculaires extérieurs des relations de distance peuvent être efficacement exécutés par la FRETTE.

L'application de la FRETTE dans le mappage biologique de membrane avait eu comme conséquence des récepteurs de lectin groupant, la distribution extérieure de cellules des récepteurs tyrosine kinase et des boîtiers hématopoïétiques des molécules de différenciation, et les variations conformationnelles des molécules importantes du composé I d'histocompatibilité sur le grippement et le potentiel de membrane de ligand changent.

Applications en biologie cellulaire

RONGEZ la représentation qui emploie le mutant spectral de GFP ajoute la capacité pour surveiller et localiser le grippement et les interactions protéine-protéine d'ion en cellules vivantes. Les protéines réceptrices significatives de transmembrane qui sont impliquées dans la signalisation d'adhérence et de cellules sont souvent connues comme intégrine.

Par exemple, des interactions expressément in vivo de l'intégrine intermoléculaire sont trouvées, qui est activée par la microscopie de FRETTE qui est composée d'une paire de frettes de CFP/YFP. Le couplage local de Rac-effecteur est induit par Rac de guidage aux membranes et à le détacher du Rho-GDI.

En outre, en raison de sa dispersion homogène dans la cellule, Rac est constitutivement en activité ; il agit l'un sur l'autre sélecteur avec des effecteurs aux endroits particuliers de l'arête de cellules. On peut remarquer les origines et l'achêvement de la signalisation de Ca2+ dans les parties cellulaires spécifiques telles que le réticulum endoplasmique, le noyau, ou le cytoplasme en prévoyant le changement de rapport de l'intensité des molécules de distributeur de fluorescence et d'accepteur actuelles dans les cellules sous tension.

Applications de FRETTE dans d'autres biomolécules

On l'a pensé que les réactions enzymatiques qui sont pilotées par dynamique sont conformationnelles. Une enzyme dans une structure ouverte est censée attendre un substrat et le catalyser dans une structure fermée. Alors la réaction autre progresse parmi les molécules d'une façon asynchrone.

Ceci implique que la kinase d'adenylate (AK) a été dans l'équilibre entre la structure fermée et ouverte en dépit de la nature du grippement de substrat, qui modifie seulement les régimes du passage. Contrairement à RMN ou radiographiez la cristallographie, approches de norme pour déterminer la structure biomoléculaire, mesure de smFRET n'a pas besoin de la molécule pour atteindre une structure évoluée.

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Last Updated: May 24, 2019

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