TRASTE: Usos en biología

La transferencia de energía de resonancia de la fluorescencia (FRET) es un mecanismo de la transferencia de energía que se utiliza extensamente en experimentos biológicos tales como examen de la estructura molecular. Se refiere a menudo como “regla espectroscópica,” debido a su naturaleza en donde la distancia entre dos fluorophores se determina como la índice de las intensidades de la fluorescencia.

Haber: Micha Weber/Shutterstock.com

El uso de las moléculas biológicas del TRASTE se considera ser inevitable, pues sus mediciones son altamente sensibles en las distancias que están en la escala del nanómetro. La medición del TRASTE se puede realizar con la única sensibilidad de la molécula solamente, pues se basa en técnica de medición fluorescente.

Usos del TRASTE en la detección del hibridación de la DNA

El uso del TRASTE en el hibridación de las antenas de la DNA aumenta el hibridación en dos aspectos.

  1. Haga señales de las antenas se extinguen que son unreacted cuando se realiza el hibridación basó en TRASTE. Esto evita la necesidad de procedura y del apoyo sólido cuando la reacción del hibridación se observa en tiempo real como análisis homogéneo. La ventaja de este tipo homogéneo de análisis es su menos complejidad y velocidad, para poderla adaptarse fácilmente para el funcionamiento automatizado.
  2. In vivo los hibridaciones se pueden realizar directamente en células vivas descubriendo solamente las señales de la antena que son cruzadas por hibridación y debido a la velocidad creciente del hibridación en la solución. Las antenas del hibridación del TRASTE de diversos formatos se han desarrollado.

Usos del TRASTE en la detección de la mutación de la DNA

Los sistemas de transferencia de energía se pueden crear (los análisis de TDI) o romper (los análisis del invasor) por las antenas del TRASTE del oligonucleótido que se han desarrollado específicamente para la detección de la mutación de la DNA. Los análisis del invasor utilizan antenas degradables como 5' los análisis de la nucleasa; por otra parte, emplean dos antenas degradables bastante que una y una antena no-degradable que trabaja en concierto.

Los oligonucleótidos lineales y horquilla-dados forma se emplean en desarrollar las estructuras ramificadas de la DNA y entonces por lo tanto se destruyen durante la reacción. La otra ventaja de esta aproximación es que da lugar a la amplificación efectiva de la señal y no requiere la polimerización en cadena para descubrir muy pocas series del objetivo. La ventaja distinta de los análisis de TDI es que las antenas del TRASTE están producidas en proceso de la detección pero requiere la amplificación de la polimerización en cadena.

Uso del TRASTE en estudios de la proteína

La acción recíproca superficial de la proteína de la célula desempeña un papel vital en el proceso de la transmisión de señales de la transmembrana. Los resultados finales importantes de las acciones recíprocas del receptor del ligand son agrupamiento de receptores y cambian en su conformación.  El TRASTE se utiliza como herramienta para determinar el lazo de la distancia y la organización supramolecular de las moléculas de la superficie de la célula. En dinámica de la proteína, el plegamiento de proteína es el proceso más importante que se investiga extensamente. el smFRET se ha utilizado para aprender más sobre doblar y dinámica de la transición del despliegue del dos-estado y de moléculas más grandes del multi-dominio.

Uso del TRASTE en la correspondencia biológica de la membrana

La acción recíproca de proteínas que está presente en la superficie de la célula es esencialmente importante para el proceso de la transmisión de señales de la transmembrana. El agrupamiento de los receptores y las variaciones en sus conformaciones son los factores claves que afectan al resultado final de la acción recíproca de los receptores del ligand. La organización de la célula y la determinación supramoleculares superficiales de los lazos de la distancia se pueden realizar eficientemente por el TRASTE.

El uso del TRASTE en la correspondencia biológica de la membrana había dado lugar a los receptores del lectin que se agrupaban, a la distribución superficial de la célula de las cinasas de la tirosina del receptor y de los atados hematopoyéticos de las moléculas de la diferenciación, y a las variaciones conformacionales de las moléculas importantes del complejo I de la histocompatibilidad en el atascamiento del ligand y el cambio potencial de la membrana.

Usos en biología celular

PREOCÚPESE la proyección de imagen que utiliza el mutante espectral de GFP agrega la capacidad para vigilar y para localizar acciones recíprocas del atascamiento y de la proteína-proteína del ión en células vivas. Las proteínas de receptor importantes de la transmembrana que están implicadas en la transmisión de señales de la adherencia y de la célula se conocen a menudo como integrin.

Por ejemplo, las acciones recíprocas explícitas ines vivo del integrin intermolecular se descubren, que es habilitado por la microscopia del TRASTE que se comprende de un par de trastes de CFP/YFP. El acoplamiento local del Rac-determinante es inducido por Rac que conduce a las membranas y a destacarlo de Rho-GDI.

Además, debido a su dispersión homogénea en la célula, Rac es constitutivo activo; obra recíprocamente selectivamente con determinantes en las áreas determinadas del filo de la célula. Las creaciones y el fin de la transmisión de señales de Ca2+ en secciones celulares específicas tales como retículo endoplásmico, núcleo, o citoplasma pueden ser notados calculando el cambio de la índice en la intensidad de las moléculas dispensadoras de aceite de la fluorescencia y del aceptor presentes en las células vivas.

Usos del TRASTE en otras biomoléculas

Se ha pensado que las reacciones enzimáticas que son impulsadas por la dinámica son conformacionales. Una enzima en una estructura abierta se supone para esperar un substrato y para catalizarlo en una estructura cerrada. Entonces la reacción más futura progresa entre las moléculas de una manera asíncrona.

Esto implica que la cinasa del adenilato (AK) ha estado en equilibrio entre la estructura cerrada y abierta a pesar de la naturaleza del atascamiento del substrato, que altera solamente los índices de transición. En contraste con el RMN o la cristalografía de la radiografía, las aproximaciones del patrón para determinar la estructura biomolecular, medición del smFRET no necesitan la molécula lograr una estructura más de categoría alta.

Fuentes:

  1. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2173363/
  2. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11999693
  3. https://pdfs.semanticscholar.org/f1d4/b8bbcb0a98ed4126ed8122622752e556d6a7.pdf
  4. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4215735/
  5. https://www.thermofisher.com/in/en/home/references/molecular-probes-the-handbook/technical-notes-and-product-highlights/fluorescence-resonance-energy-transfer-fret.html
  6. https://academic.oup.com/jmicro/article-abstract/62/4/419/1989165/Extensive-use-of-FRET-in-biological-imaging

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Last Updated: May 24, 2019

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