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Cytométrie de flux : Approches combinatoires au comptage de cellules

La cytométrie de flux est une technique polyvalente d'analyse de cellules qui peut être employée pour analyser les types multiples de cellules. La combinaison de la cytométrie de flux avec de diverses autres techniques peut un accroissement plus ultérieur sa souplesse d'utilisation et fournir des caractéristiques plus détaillées. 

La cytométrie de flux emploie des fluorophores pour trouver des cellules pour le compteDavidBautista | Shutterstock

Les principes de la cytométrie de flux et du comptage de cellules

Quelle est cytométrie de flux ?

La cytométrie de flux est une technique qui concerne réussir des cellules suspendues dans un liquide par un laser, alors que la dispersion de la lumière est trouvée et traitée en temps réel. La cytométrie de flux mesure également l'intensité de fluorescence des cellules. L'information obtenue de la cytométrie de flux peut être employée pour discerner les caractéristiques variées des cellules, telles que la taille, la morphologie, les bornes extérieures de cellules, les ions intracellulaires, l'expression de la protéine, le teneur d'ADN, ainsi que les fonctionnements homéostatiques variés.

La cytométrie de flux peut être employée pour mesurer des paramètres multiples d'une cellule simultanément, qui est réalisée en étiquetant différents paramètres de cellules avec différents fluorophores. La cytométrie de flux peut également mesurer différents types de cellules de multiple simultanément, qui se nomme multiplexage de `'. Le multiplexage est réalisé en étiquetant les différents types de cellules avec différents fluorophores et peut être employé pour étudier des gènes, le fonctionnement de protéine, et l'ensemble moléculaire en cellules.

Améliorations au comptage de cellules de cytométrie de flux

La cellule fluorescente barcoding permet à plus d'analytes d'être réussies par le cytometer de flux, qui augmente le rendement de la cytométrie de flux. Chaque cellule réussie par le cytometer de flux est marquée avec code barre différent de l'intensité de fluorescence et de la longueur d'onde d'émission.

Cette méthode de barcoding a été employée pour protéger des bibliothèques des cellules pour des inhibiteurs de la signalisation de récepteur des lymphocytes T et de cytokine. Ceci a été employé pour déterminer l'efficacité et la sélectivité de certains médicaments sur des aspects variés du système immunitaire.

Employant seulement trois fluorophores différents, il est possible d'analyser 96 analytes différentes simultanément. Comme résultat, l'augmentation du nombre de teintures utilisées augmentera le nombre d'analytes possibles exponentiellement.

Des cytometers multiples de flux de laser en combination avec les sondes neuves et l'instrumentation ont tenu compte pour que l'émission de la fluorescence jusqu'à 17 soit employée simultanément. Ceci tient compte de l'analyse d'un grand nombre d'analytes, qui peuvent donner les ensembles de données extrêmement détaillés et complets.

Traiter d'échantillon de cytométrie de flux

Dans les premiers temps de l'analyse de cytométrie de flux, seulement environ deux échantillons par minute étaient favorables pour l'analyse. Cependant, la recherche et développement continue du procédé de cytométrie de flux ont augmenté le débit de cytométrie de flux, permettant pour analyser pas moins 40-100 échantillonne une minute. Ceci tient compte d'un ensemble de 384 puits pour s'analyser toutes les 10 mn. Les concentrations en cellules d'entrée pour ceci sont 1-20 millions de cellules par millilitre, avec une gamme de 4 décennies de l'intensité de fluorescence

Le débit élevé de la cytométrie de flux a tenu compte des ensembles de données sur des procédés très spécifiques de cellules pour être effectué (par exemple ligand et interactions de récepteur protéine-accouplées par G et la signalisation donnante droit).

Combinaison de la cytométrie de flux avec d'autres techniques d'analyse de cellules

Combinaison de la cytométrie de flux et de la cytométrie de la masse

La cytométrie de flux et la cytométrie de la masse ont été employées ensemble pour analyser des cellules pour des biomarqueurs de greffe continuelle contre la maladie d'hôte (cGVHD). Dans ce but, du sang a été pris des patients montrant le cGVHD et des cellules mononucléaires périphériques de sang (PBMCs) ont été retirées du plasma et puis souillées.

Un total de 44 anticorps pour différentes bornes de cGVHD ont été employés pendant cette étude. Après la souillure du PBMCs ils se sont analysés utilisant trier fluorescence-activé de cellules (qui est un type spécialisé de cytométrie de flux).

Des échantillons de PMBC provenant des patients ont été traités avec les produits chimiques variés avant de s'analyser utilisant la cytométrie de masse. La caractéristique de la cytométrie de flux et de la cytométrie de la masse s'est analysée pour évaluer l'état de cGVHD des patients. L'analyse a constaté que des niveaux plus bas des cellules de T muqueux-associées ont été vus dans les patients présentant le cGVHD sévère.

D'autre part, les patients présentant le cGVHD modéré et sévère ont montré une population à cellule T active plus élevée et une expression plus élevée des chémokines et des cytokines impliquées dans une réaction immunitaire active. Les découvertes de cette analyse faciliteront le cGVHD de compréhension et en fournissant de meilleures options de demande de règlement pour lui.

Combinaison de la cytologie de cytométrie de flux et de ponction à l'aiguille fine

L'analyse de cytométrie de flux et la cytologie de ponction à l'aiguille fine (FNAC) ont été employées pour diagnostiquer et classifier le lymphome non Hodgkinien (NHL). Dans une étude, des prélèvements de FNAC ont été préparées et souillées. Le matériau a été alors rassemblé pour l'immunophénotypage de cytométrique de flux (FCI), alors que les échantillons étaient traités et une Commission des anticorps était employée pour immunotyping. Les découvertes de cytologie et les caractéristiques de FCI se sont analysées dans la conjonction pour diagnostiquer et classifier le NHL selon les catégories existantes.

Le matériau rassemblé pour FCI a été également employé pour l'analyse de cytométrie de flux de double-couleur. Ce matériau a été préparé et étiqueté avec deux fluorophores différents, et des anticorps pour différentes protéines CD ont été employés. L'analyse de toutes les caractéristiques rassemblées a tenu compte de 79% de caisses de NHL analysées sous-pour être classé.

Les sous-classes ont compris le petit lymphome lymphatique de cellules, le lymphome de cellules de mantel, et le grand lymphome de B, ainsi que beaucoup d'autres, qui est extrêmement important pour l'inducteur de l'hématologie.

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Last Updated: Mar 26, 2019

Written by

Samuel Mckenzie

Sam graduated from the University of Manchester with a B.Sc. (Hons) in Biomedical Sciences. He has experience in a wide range of life science topics, including; Biochemistry, Molecular Biology, Anatomy and Physiology, Developmental Biology, Cell Biology, Immunology, Neurology  and  Genetics.

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    Mckenzie, Samuel. (2019, March 26). Cytométrie de flux : Approches combinatoires au comptage de cellules. News-Medical. Retrieved on June 12, 2021 from https://www.news-medical.net/life-sciences/Flow-Cytometry-Combinatorial-Approaches-to-Cell-Counting.aspx.

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