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Citometria a flusso: Approcci combinatori a contaggio di cellule

La citometria a flusso è una tecnica versatile dell'analisi delle cellule che può essere usata per analizzare i tipi multipli delle cellule. Combinando la citometria a flusso con le varie tecniche può accrescimento più ulteriore la sua versatilità e fornire i dati più dettagliati. 

La citometria a flusso usa i fluorophores per individuare le celle per contareDavidBautista | Shutterstock

I principi di citometria a flusso e di contaggio di cellule

Che cosa è citometria a flusso?

La citometria a flusso è una tecnica che comprende passare le celle sospese in un liquido tramite un laser, mentre lo scattering dell'indicatore luminoso è individuato ed elaborato in tempo reale. La citometria a flusso egualmente misura l'intensità della fluorescenza delle celle. Le informazioni ottenute da citometria a flusso possono essere usate per distinguere le varie caratteristiche delle celle, quali la dimensione, la morfologia, gli indicatori di superficie delle cellule, gli ioni intracellulari, l'espressione della proteina, il contenuto del DNA come pure le varie funzioni omeostatiche.

La citometria a flusso può essere usata per misurare simultaneamente i parametri multipli di una cella, che è raggiunta etichettando i parametri differenti delle cellule con differenti fluorophores. La citometria a flusso può anche misurare simultaneamente i tipi differenti delle cellule di multiplo, che è definita ` che multiplexa'. La multiplazione è raggiunta etichettando i tipi differenti delle cellule con differenti fluorophores e può essere usata per studiare i geni, la funzione della proteina e l'installazione molecolare in celle.

Miglioramenti a contaggio di cellule di citometria a flusso

La cella fluorescente che barcoding permette che più analiti siano passati con il cytometer di flusso, che aumenta il risparmio di temi di citometria a flusso. Ogni cella passata con il cytometer di flusso è contrassegnata con un codice a barre differente dell'intensità della fluorescenza e della lunghezza d'onda dell'emissione.

Questo metodo di barcoding è stato usato per schermare le librerie delle celle per gli inibitori del recettore delle cellule t e della segnalazione di citochina. Ciò è stata usata per provare ad efficacia ed a selettività di determinate droghe sui vari aspetti del sistema immunitario.

Usando soltanto tre fluorophores differenti, è possibile analizzare simultaneamente 96 analiti differenti. Di conseguenza, aumentare il numero delle tinture usate aumenterà il numero degli analiti possibili esponenzialmente.

I cytometers multipli di flusso del laser congiuntamente alle nuove sonde e la strumentazione hanno tenuto conto l'emissione della fluorescenza fino a 17 essere usati simultaneamente. Ciò tiene conto l'analisi di tantissimi analiti, che possono dare gli insiemi di dati estremamente dettagliati e completi.

Manipolazione del campione di citometria a flusso

Negli inizi dell'analisi di citometria a flusso, soltanto circa due campioni al minuto erano favorevoli per l'analisi. Tuttavia, ricerca e sviluppo continui del trattamento di citometria a flusso hanno aumentato la capacità di lavorazione di citometria a flusso, permettente di analizzare fino a 40-100 campiona un minuto. Ciò tiene conto un insieme di 384 pozzi essere analizzata ogni 10 minuti. Le concentrazioni nelle cellule dell'input per questa sono 1-20 milione celle per millilitro, con un intervallo di 4 decadi dell'intensità della fluorescenza

L'alta capacità di lavorazione di citometria a flusso ha tenuto conto gli insiemi di dati sui trattamenti molto specifici delle cellule essere fatta (per esempio legante ed interazioni del ricevitore proteina-accoppiate G e la segnalazione risultante).

Combinando citometria a flusso con altre tecniche di analisi delle cellule

Combinazione del cytometry della massa e di citometria a flusso

Il cytometry della massa e di citometria a flusso è stato usato insieme per analizzare le celle per i biomarcatori dell'innesto cronico contro la malattia ospite (cGVHD). Per quello scopo, il sangue è stato catturato dai pazienti che esibiscono il cGVHD e le celle mononucleari di sangue periferico (PBMCs) sono state eliminate dal plasma e poi sono state macchiate.

Complessivamente 44 anticorpi per vari indicatori di cGVHD sono stati usati durante questo studio. Dopo la macchiatura del PBMCs sono stati analizzati facendo uso dell'ordinamento fluorescenza-attivato delle cellule (che è un tipo specializzato di citometria a flusso).

I campioni di PMBC dai pazienti sono stati trattati con i vari prodotti chimici prima di essere analizzato facendo uso del cytometry di massa. I dati dalla citometria a flusso e dal cytometry della massa sono stati analizzati per valutare lo stato del cGVHD dei pazienti. L'analisi ha trovato che i livelli più bassi delle celle di T mucoso-associate sono stati veduti in pazienti con cGVHD severo.

D'altra parte, i pazienti con cGVHD moderato e severo hanno mostrato un'più alta popolazione a cellula T attiva e un'più alta espressione dei chemokines e delle citochine coinvolgere in una risposta immunitaria attiva. I risultati da questa analisi aiuteranno nel cGVHD di comprensione e nella fornitura delle opzioni migliori del trattamento per.

Combinazione citometria a flusso e della citologia fine di aspirazione del ago di stampa

L'analisi di citometria a flusso e la citologia fine di aspirazione del ago di stampa (FNAC) sono state usate per diagnosticare e classificare il linfoma non Hodgkin (NHL). In uno studio, le sbavature di FNAC sono state preparate e macchiato state. Il materiale poi è raccolto stato per immunophenotyping cytometric di flusso (FCI), mentre i campioni sono elaborato stati e un comitato degli anticorpi è usato stato per immunotyping. I risultati di citologia ed i dati di FCI sono analizzato stati nella congiunzione per diagnosticare e classificare il NHL conformemente alle classificazioni attuali.

Il materiale raccolto per FCI egualmente è stato usato per l'analisi di citometria a flusso di doppio-colore. Questo materiale è stato preparato ed etichettato stato con due fluorophores differenti e gli anticorpi per varie proteine del CD sono usato stati. L'analisi di tutti i dati raccolti ha tenuto conto 79% delle casse del NHL analizzate sotto-per essere classificato.

Le sottoclassi hanno compreso il piccolo linfoma linfatico delle cellule, linfoma delle cellule della mensola del camino e grande linfoma di B come pure molti altri, che è estremamente importante per il campo dell'ematologia.

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Last Updated: Mar 26, 2019

Written by

Samuel Mckenzie

Sam graduated from the University of Manchester with a B.Sc. (Hons) in Biomedical Sciences. He has experience in a wide range of life science topics, including; Biochemistry, Molecular Biology, Anatomy and Physiology, Developmental Biology, Cell Biology, Immunology, Neurology  and  Genetics.

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