Advertencia: Esta página es una traducción de esta página originalmente en inglés. Tenga en cuenta ya que las traducciones son generadas por máquinas, no que todos traducción será perfecto. Este sitio Web y sus páginas están destinadas a leerse en inglés. Cualquier traducción de este sitio Web y su páginas Web puede ser imprecisa e inexacta en su totalidad o en parte. Esta traducción se proporciona como una conveniencia.

Cytometry de flujo: Aproximaciones combinatorias a la numeración celular

El cytometry de flujo es una técnica versátil del análisis de la célula que se puede utilizar para analizar tipos múltiples de la célula. Combinar cytometry de flujo con otras técnicas puede aumento posterior su flexibilidad y ofrecer datos más detallados. 

El cytometry de flujo utiliza fluorophores para descubrir las células para contarDavidBautista | Shutterstock

Los principios del cytometry de flujo y de la numeración celular

¿Cuál es cytometry de flujo?

El cytometry de flujo es una técnica que implica el pasar de las células suspendidas en un líquido a través de un laser, mientras que el dispersar de la luz se descubre y se tramita en tiempo real. El cytometry de flujo también mide la intensidad de la fluorescencia de células. La información ganada de cytometry de flujo se puede utilizar para distinguir las diversas características de células, tales como talla, morfología, marcadores superficiales de la célula, iones intracelulares, expresión de la proteína, contenido de la DNA, así como diversas funciones homeostáticas.

El cytometry de flujo se puede utilizar para medir parámetros múltiples de una célula simultáneamente, que es lograda marcando diversos parámetros de la célula con etiqueta con diversos fluorophores. El cytometry de flujo puede también medir diversos tipos de la célula del múltiplo simultáneamente, que se llama ` que multiplexa'. La multiplexación es lograda marcando los diversos tipos de la célula con etiqueta con diversos fluorophores y se puede utilizar para estudiar genes, la función de la proteína, y al montaje molecular en células.

Mejorías a la numeración celular del cytometry de flujo

La célula fluorescente barcoding permite que más analitos sean pasados con el cytometer del flujo, que aumenta la eficiencia del cytometry de flujo. Cada célula pasajera con el cytometer del flujo etiqueta con un diverso código de barras de la intensidad de la fluorescencia y de la longitud de onda de la emisión.

Este método de barcoding se ha utilizado para revisar bibliotecas de las células para los inhibidores de la transmisión de señales del receptor y del cytokine del linfocito T. Esto fue utilizada para probar para la eficacia y la selectividad de ciertas drogas en diversos aspectos del sistema inmune.

Usando solamente tres diversos fluorophores, es posible analizar 96 diversos analitos simultáneamente. Como consecuencia, el aumento del número de tintes usados aumentará el número de analitos posibles exponencial.

Los cytometers múltiples del flujo del laser conjuntamente con nuevas antenas y la instrumentación han permitido para que la emisión de la fluorescencia hasta 17 sea utilizada simultáneamente. Esto permite el análisis de un gran número de analitos, que pueden dar conjuntos de datos extremadamente detallados y completos.

Manejo de la muestra del cytometry de flujo

En los primeros días del análisis del cytometry de flujo, solamente cerca de dos muestras por minuto eran favorables para el análisis. Sin embargo, la investigación y desarrollo contínua del proceso del cytometry de flujo ha aumentado la producción del cytometry de flujo, permitiendo analizar tanto como 40-100 muestrea un minuto. Esto permite un equipo de 384 pozos ser analizada cada 10 minutos. Las concentraciones de la célula de la entrada para esto son 1-20 millones de células por mililitro, con un alcance de 4 décadas de la intensidad de la fluorescencia

La alta producción del cytometry de flujo ha permitido conjuntos de datos en procesos muy específicos de la célula ser hecha (e.g ligand y las acciones recíprocas proteína-acopladas G del receptor y la transmisión de señales resultante).

Combinar cytometry de flujo con otras técnicas del análisis de la célula

Combinar cytometry de flujo y cytometry en masa

El cytometry de flujo y el cytometry en masa fueron utilizados juntos para analizar las células para los biomarkers del injerto crónico comparado con enfermedad del ordenador principal (cGVHD). Para ese propósito, la sangre fue tomada de los pacientes que exhibían el cGVHD y las células mononucleares de la sangre periférica (PBMCs) fueron quitadas del plasma y después manchadas.

Un total de 44 anticuerpos para los diversos marcadores del cGVHD fueron utilizados durante este estudio. Después de manchar el PBMCs eran analizados usando la clasificación fluorescencia-activada de la célula (que es un tipo especializado de cytometry de flujo).

Las muestras de PMBC de pacientes fueron tratadas con las diversas substancias químicas antes de ser analizado usando cytometry en masa. Los datos del cytometry de flujo y del cytometry en masa eran analizados para fijar el estado del cGVHD de los pacientes. El análisis encontró que los niveles inferiores de las células de T de la mucosa-asociadas fueron considerados en pacientes con el cGVHD severo.

Por otra parte, los pacientes con el cGVHD moderado y severo mostraron una población activa más alta del linfocito T y una expresión más alta de los chemokines y de los cytokines implicados en una inmunorespuesta activa. Las conclusión de este análisis ayudarán en cGVHD de comprensión y ofrecer mejores opciones del tratamiento para él.

Combinar cytometry de flujo y la citología fina de la aspiración de la aguja

El análisis del cytometry de flujo y la citología fina de la aspiración de la aguja (FNAC) fueron utilizados para diagnosticar y para clasificar linfoma no-Hodgkin (NHL). En un estudio, las manchas de FNAC fueron preparadas y manchadas. El material entonces cerco para immunophenotyping cytometric del flujo (FCI), mientras que las muestras fueron tramitadas y un panel de anticuerpos fue utilizado para immunotyping. Las conclusión de la citología y los datos de FCI eran analizados en la conjunción para diagnosticar y para clasificar el NHL de acuerdo con las clasificaciones existentes.

El material cerco para FCI también fue utilizado para el análisis del cytometry de flujo del doble-color. Este material fue preparado y marcado con etiqueta con dos diversos fluorophores, y los anticuerpos para las diversas proteínas del CD fueron utilizados. El análisis de todos los datos cerco permitió el 79% de cajas del NHL analizadas sub-para ser clasificado.

Las subclases incluyeron pequeño linfoma linfático de la célula, linfoma de la célula de la chimenea, y el linfoma grande de B, así como muchos otros, que es extremadamente importante para el campo de la hematología.

Fuentes

Further Reading

Last Updated: Mar 26, 2019

Written by

Samuel Mckenzie

Sam graduated from the University of Manchester with a B.Sc. (Hons) in Biomedical Sciences. He has experience in a wide range of life science topics, including; Biochemistry, Molecular Biology, Anatomy and Physiology, Developmental Biology, Cell Biology, Immunology, Neurology  and  Genetics.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Mckenzie, Samuel. (2019, March 26). Cytometry de flujo: Aproximaciones combinatorias a la numeración celular. News-Medical. Retrieved on June 25, 2021 from https://www.news-medical.net/life-sciences/Flow-Cytometry-Combinatorial-Approaches-to-Cell-Counting.aspx.

  • MLA

    Mckenzie, Samuel. "Cytometry de flujo: Aproximaciones combinatorias a la numeración celular". News-Medical. 25 June 2021. <https://www.news-medical.net/life-sciences/Flow-Cytometry-Combinatorial-Approaches-to-Cell-Counting.aspx>.

  • Chicago

    Mckenzie, Samuel. "Cytometry de flujo: Aproximaciones combinatorias a la numeración celular". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/Flow-Cytometry-Combinatorial-Approaches-to-Cell-Counting.aspx. (accessed June 25, 2021).

  • Harvard

    Mckenzie, Samuel. 2019. Cytometry de flujo: Aproximaciones combinatorias a la numeración celular. News-Medical, viewed 25 June 2021, https://www.news-medical.net/life-sciences/Flow-Cytometry-Combinatorial-Approaches-to-Cell-Counting.aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News Medical.